SYBRGreenⅠ荧光定量RT-PCR检测J亚群禽白血病病毒方法的建立及其应用.pdf

摘要 J 亚群禽白血病( (Avian Leukosis Virus Subgroup J ,ALV-J)是由J 亚群禽白血 病病毒引起的鸡骨髓样细胞瘤以及其它肿瘤性性疾病。1999 年，我国首次由杜 岩等在肉鸡的商品代中分离了ALV-J 。J 亚群禽白血病在我国呈现了不断发展的 态势,宿主范围已从肉用型鸡向蛋鸡和地方鸡种蔓延,病鸡的生产性能降低，死亡 率明显升高, 给我国养禽业造成严重的经济损失。因此，建立快速、特异和敏感 的ALV-J 检测方法具有重要的实际意义。 为建立SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测ALV-J 的方法，本研究以ALV-J原型 毒株HPRS-103基因组中pol 基因3’端和gp85基因之间的保守区域作为检测靶基因 片段，构建其重组质粒作为阳性标准品，通过对模板浓度、引物浓度和退火温度 的优化，建立了ALV-J SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法。结果显示该方法的最低 3 检测限度为2.36×10 DNA分子/μL，较普通PCR提高100倍；可特异性扩增出545bp 的ALV-J 目的基因，而对其他禽源病毒无交叉反应；批内变异系数为0.17~2.43% ， 批间变异系数2.73~3.68