双重抗肺纤维化基因嵌合重组体蛋白的研制.pdfVIP

双重抗肺纤维化堆因嵌含蓖组体蛋白的研制 中文摘要 中文摘要 目的：中性粒细胞抑制因子(NIF)是整合素B2的专～性拮抗剂，能抑制中 性粒细胞与内皮细胞的粘附和聚集，阻止白细胞的渗透和浸润。角质细胞生长因 子(KGF)是成纤维细胞生长因子家族中的一员，由间充质细胞分泌并特异性地 作用于上皮细胞促进其生长繁殖。许多实验均证明KGF和NIF在肺脏的发育、炎 症和修复中发挥重要的作用。针对NIF能够抑制病理性自身免疫反应和KGF能够 修复损伤的肺泡上皮及抑制纤维化的功效，我们构建了这两种细胞因子的基因嵌 合重组体，并进行表达，目的是研制能够治疗急性肺损伤和肺纤维化的重组蛋白， 为进一步的研究和开发奠定基础。方法：以8个甘氨酸作为铰链区，运用oveMap PCR的方法将NIF与KGF连接，获得双重抗肺纤维化基因嵌合重组体卜ⅨM的基 因序列。利用pET原核表达系统，在BL21Star(DE3)plysS大肠杆菌中高效表达 外活性进行测定。结果：本研究成功构建了双重抗肺纤维化基因重组嵌合体NKM； 并在BL21 疫活性：通过DEAE层析柱纯化得到纯度为80％的NⅪvI；体外细胞活性测定表明， NKM对白细胞粘附有剂量依赖性的抑