胸膜肺炎放线杆菌毒素IV基因的克隆表达及其间接ApxIVA3-ELISA方法的初步建立.pdfVIP

摘 要 猪传染性胸膜肺炎(porcinecontagious 放线杆菌(Actinobacillus 性呼吸道疾病，给世界各地的养猪业造成了巨大的经济损失。大量研究工作证实， APP产生的溶血外毒素是其最重要的毒力因子和主要的保护性抗原，而只有毒素 四(ApxlV)是所有15个血清型都分泌的，因此对其进行研究具有很重要的意义。 本试验旨在应用分子生物学技术．对编码ApxlV3’一端的ApxlVA部分基因片段在 原核系统中进行表达，初步建立间接ApxIVA3．ELISA方法，为猪传染性胸膜肺炎 的新型诊断方法的建立奠定基础。 本试验以提取的猪胸膜肺炎放线杆菌血清8型菌株基因组DNA为模板，用PCR 8-T进行连 方法扩增出ApxlVA3特异性基因片段，PCR产物经纯化后与载体pMDl 接、转化，经酶切及序列分析鉴定后，亚克隆到原核表达载体pET一28a中，构建 融合蛋白分子质量约为l8Ku，与预期片段大小相符；将经过超声破碎的菌液离心 取沉淀经尿素洗涤溶解后用镍金属螫合层析柱进行纯化。Western-blot分析证实， 该融合鲞白具有免疫学活性。在经