中国野生葡萄抗黑痘病基因RAPD标记克隆测序的研究.pdfVIP

摘 要 1.采用田间自然鉴定的方法，研究了中国野生葡萄6种 13个株系和欧洲 葡萄及其杂种，葡萄种间杂交组合毛葡萄商-24X欧洲葡萄龙眼的F:群体对黑 痘病的抗性。除果表明，中国野生葡萄6种13个株系对黑痘病表现了高度的 抗性。种间杂交后代对黑痘病的抗性存在很大的差异。欧亚种葡萄品种间对黑 痘病的抗性存在抗病和感病两种类型。欧美杂种葡萄品种间对黑痘病的抗性只 存在抗病程度的差异。这为利用 RAPD技术对中国野生葡萄抗黑痘病基因的分 T*T,ipIT下了qt}V*A汀 2.以中国野生葡萄的部分株系、河岸葡萄、S04和欧洲葡萄部分品种的幼 叶为试材，采用改良CTAB法，提取葡萄基因组。NA的完整性好、纯度敲厂以 所提葡萄基因组DNA为模板，对影响RAPD分析的Mgt浓度、dNTPs浓度、模板 DNA浓度、Tag酶的量、引物的量等进行了研究，建立了适于葡萄RAPD分析的 反应体系:在251a1反应混合液中，含Mgt1.OmM,dNTPs0.1mM，模板20ng, TagDNA聚合酶1.0U随机引物。.8111.夕/ 3.以葡萄种间杂交组合毛葡萄商一24X欧洲葡萄龙眼的F，群体为试材，运 用RAPD技术，采用集群分离分析 (bulkedsegregantanalysis,BSA)的方法进行 中国野生葡萄抗黑痘病基因连锁的分子标记的研究，获得了与抗病基因相连锁 的RAPD标记:OPV02一600和OPJ13一300，并在杂种后代、葡萄野生种、河岸 葡萄和欧洲葡萄中进行了验证。 4.将OPJ13-300和OPV02-600用试剂盒回收，连接T载体并克隆，筛 选、鉴定重组克隆，对重组质粒大量抽提、纯1k,p须}1F扮OPJ13一30。和。PV02 \ -600测出了全序列。它们的的实际碱基数是305by和616by，这为抗病基 因的分子标记辅助选择和利用提供了依据;获得了抗黑痘病基因的RAPD标记 OPV02一616和 QPT13一。05为抗病基因的研究及最终将抗病基因导入栽培品 种提供了。NA依据斤一 关键词:中国野葡萄，黑痘病，RAPD，克隆，测序 本文是在导师王跃进教授的精心指导下完成的。从论文选题、 确定研究方案和实验进行的整个过程都得到了导师的悉心指导。导 师渊博的科学理论知识，严谨、求实的科学态度，忘我的工作热情 以及开拓创新的科研精神，将使我受益终身。 在开题论证过程中，贺普超教授、许晖副教授、饶景萍副教授、 马锋旺副教授、任小林副教授提出了宝贵建议。 在中国热带农业科学院热带作物生物技术国家重点实验室客座 期间，得到了周鹏副教授RAPD技术操作的具体指导。也得到了郑 学勤教授、陈守才研究员、黄俊生研究员、金志强副教授的关心和 指导。梁启镜先生在生活上给予了诸多关怀。张银东博士、彭世清 博士、黄贵修先生、邵寒霜博士、李继红博士、吴坤鑫博士、李小 娟博士、符少萍女士、赖心田先生、西北农业大学的途卫国、杨克 强、张剑侠、罗素兰、刘天明、王永飞等同学及中山医科大学的梁 迎健女士等给子了热情的帮助和指导。 本研究为导师王跃进教授主持的国家自然科学基金项目 和教育部资助年青优秀教师基金项目的部分研究内 容.正是由于导师的科研项目及基金的支持和资助，才使本论文得 以)II)q利完成。 值此论文完成之际，对以上关心我的老师和朋友致以诚挚的谢 意! 最后，感谢我的爱人朱萍女士和家人对我的理解和支持。 王西平 1999年 10月 中国野生葡萄抗墓疚病基因RAPD标记充隆测序的研究 1 文献综述 1.1 葡萄黑痘病 1.1.1 葡萄黑疽病的起源和分布 葡萄黑痘病原产欧洲和北非160]，是欧洲葡萄的一种古老病害。时至今日， 葡萄黑痘病还在世界上各个葡萄产区不同程度地危害葡萄生产，尤其是单一 栽培欧洲葡萄的高温多雨地区，为害特别严重。葡萄黑痘病何时传入我国， 尚无确切证据。我国葡萄主要产区除新疆和少数地区外，大都发生这种病害， 在春夏多雨潮温地区，特别是长