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中国野生葡萄醛脱氢酶基因转化欧洲无核葡萄的研究 摘 要 本研究以 “红宝石无核”、“长穗无核白”和 “红脸无核”为材料，从器官发生途径 和胚状体发生途径建立无核葡萄遗传转化的受体系统，将连接在表达载体pWR306的中 国野生葡萄醛脱氢酶相关基因 (ALDH)导入农杆菌中，进行农杆菌介导的葡萄遗传转 化体系及转基因葡萄检测的研究，取得的主要结果如下: 1.以 “红宝石无核”和 “长穗无核白”葡萄的试管苗叶片、叶柄及茎段为材料， 研究不同植物生长调节剂对两个葡萄品种叶片、叶柄和茎段不定芽再生的影响。结果表 明，诱导 “红宝石无核”叶片不定芽再生的最佳培养基为Ms十DTZ2.om/gLN+AA 0.lm叭，再生率为3333%; “长穗无核白”叶片、叶柄不定芽再生的最佳培养基均为 MSB+AP S.mo/gL十NAAO.sm妙，再生率分别为25%和030.1%; “红宝石无核”的叶 柄不定芽再生率远远低于其叶片。“红宝石无核”和 “长穗无核白”茎段不定芽再生率 都较低，最高分别为 522%和 2.87%。不定芽伸长的最佳培养基为 1/2MSB+AP 1.Omg/L+IBAO.sm叭。再生植株的生根培养基为1/2Ms社BAO.Zm叭。 2.以 “红脸无核”花药、子房为材料，研究胚状体发生途径的再生。结果表明: 花药胚性愈伤组织诱导的最佳培养基为MSB+AP O.sm叭+2，4一DO.sm/gL，诱导率为 60%;子房胚性愈伤组织诱导的最佳培养基为Ms+BAP I.om/gL+2，4一Dl.om叭，诱导 率为25%。胚性愈伤组织接种在不含2，4一的原培养基上诱导出胚状体，花药胚状体的 诱导率为486.7%，子房胚状体的诱导率为41.67%。无激素的MS培养基是胚状体增殖 和萌发的培养基;最佳的成苗培养基为wPM十BIA01m/gL十蔗糖 巧留L，成苗率为 64.0%。 3.含醛脱氢酶相关基因 (ALDH)的农杆菌GV3011作为转化侵染菌液。通过器官 发生途径和胚状体发生途径，获得抗性再生葡萄植株。进行ALDH基因的PCR检测， 结果表明:侵染 “红宝石无核”叶片获得了71个株系的抗性再生植株，获得1个株系 的PCR阳性植株，PCR检测转化率为5.88%;转化 “长穗无核白”的叶柄获得了81个 株系的抗性再生植株，PCR检测出3个阳性植株，阳性率为616.7%。侵染 “长穗无核 白”的叶柄愈伤获得 “个株系的抗性再生植株，PCR检测出61个株系的阳性植株， 转化率为422.4%;侵染 “红脸无核”胚性愈伤组织，获得9个株系的抗性再生植株; 侵染 “红脸无核”胚状体，获得了012个株系的抗性再生植株，随机选取了03个株系 进行PCR检测，有61个株系是阳性植株，阳性率为533.3%。实验中胚状体发生途径 获得的 “红脸无核”葡萄的抗性再生率最高，PCR检测阳性率也较高。 4.“长穗无核白”关于ALDH基因的PCR检测呈阳性的6个转化株系，进行HPTn 基因的PCR检测全是阳性植株。“长穗无核白”关于ALDH基因的PCR检测呈阴性的 16个株系，进行HPTn基因的PCR检测，发现有2株是阳性植株。 5 “长穗无核白”的5个PCR阳性株系进行HPTn基因的PCR-Souhtem检测，结 果获得4个株系的PCR，Soul由el毛检测阳性植株;对4个株系阳性植株的基因组DNA进 行ALDH基因的osuthemblot检测，结果获得2个株系的Southemblot检测植株。说明 目的基因ALDH已成功的整合到葡萄基因组DNA中。 6.在温室下获得 “红宝石无核”、“长穗无核白”和 “红脸无核”葡萄的抗性再生 移栽苗。 关键词:转基因葡萄;胚状体;不定芽;农杆菌侵染 GEN卫TICTRANSFORMAll0N.OFTHENOVEL TOALDHFROM CHINESEWILDGRAPEIN EUROPEANSEEDLESSGRAPE明N[E(刃乃心不负M序百尺月L.) ABSTRACT ThebojectiveofhtisstudywasotreserachinregenerationofR‘ubyseedless，B‘luS】ISedeless，即d L‘ongThomPsnoseedless，丘创nshootorga幻ogenesisnadsmoaticembry