代谢组学用于中药质量控制及其2型糖尿病诊断和药效跟踪的研究.pdf

摘要 代谢组学作为后基因时代一种新兴的技术和理念，在药物的药效 和毒性评价、药物作用机理研究、疾病诊断、转基因食品的开发、中 药现代化等方面展现了广阔的前景。当前代谢组学研究中存在两个难 点同时也是热点问题：一是细胞、组织或体液中所有代谓}产物的定性、 定量分析，二是代谢产物复杂数据分析体系中有用信息的提取。本论 文针对这两个问题，利用联用色谱仪器，结合能有效提取和利用复杂 二维数据系统中有用信息的化学计量学多元校正、多元分辨和模式识 别方法，完成以下六个方面的工作：橘皮不同生长期次生代谢谱中黄 酮类成分和挥发油成分的变化分析；陈皮和青皮药材的质量控制研 究；2型糖尿病患者早期诊断模型的建立及生物标记物寻找；罗格列 酮治疗2型糖尿病患者的血浆游离脂肪酸代谢谱的变化情况跟踪研 究；2型糖尿病患者、2型糖尿病合并冠心病患者和健康对照者之间 判别模型的建立及生物标记物寻找；血糖、血压及血浆游离脂肪酸相 关关系研究。 结合，首次对三种不同种橘皮两类主要次生代谢产物——黄酮类和挥 发油在整个生长期的变化情况进行全面分析(第二章和第三章)。采 用直观推导式演进特征投影法(HELP)和交互移动窗口因子分析法 (AMWFA)对重叠色谱峰进行分辨，对各组分进行定性、定量分析。 用主成分分析法对不同种橘皮不同生长期的次生代谢谱进行分析，寻 找其次生代谢谱变化的共性和差异性，探询陈皮、青皮作为不同中药 使用的物质基础，为陈皮、青皮最佳采收时间的确定和质量控制提供 科学依据。 二、在中药色谱指纹图谱的基础上，利用主成分分析和偏最d-- 乘一线性判别分析，对不同种的陈皮、青皮标本药材和全国11个省、 市的商品药材进行考察，建立陈皮、青皮的判别模型及质量控制标准， 并筛选出了能有效区分这两种药材的三个化学指标物质，为“成对药 材”的判别和质量控制研究开辟了新的思路(第四章)。 三、采用GC．MS技术，结合化学计量学方法，建立2型糖尿病 早期诊断模型并寻找生物标记物(第五、六章)。本文发展了一种简 单、快速地同时测定人血浆中游离脂肪酸和酯化脂肪酸代谢谱的方 法；在此基础上，采用化学计量学模式识别的方法，成功地建立了针 对健康对照者和2型糖尿病患者的三维判别模型，所得模型具有良好 的预测能力，为2型糖尿病的早期诊断提供了可能；同时，提出一种 新的寻找生物标记物的方法——分类特征变量法，筛选出了潜在的特 征生物标记物，为研发降糖新药寻找药物靶点提供了新的思路。 四、提出了基于代谢组学研究技术的药效评价策略。利用健康对 照者和2型糖尿病患者的三维判别模型，跟踪研究罗格列酮治疗2型 糖尿病患者的血浆游离脂肪酸代谢谱的变化情况(第六章)。该方法 能够直观地反映出患者的临床治疗效果与游离脂肪酸代谢谱的变化 之间的对应关系，为建立药效的代谢组学评价平台打下了坚实的基 础。 五、对健康对照者、2型糖尿病患者和2型糖尿病合并冠心病患 者的血浆游离脂肪酸代谢谱进行判别分析，并寻找生物标记物(第七 章)。利用非相关判别矢量一线性判别分析法(UDV_LDA)，建立了 三类样本两两之间有效的判别模型，其训练和预测的结果均明显优于 生物标记物。所得结果将有助于推动2型糖尿病及冠心病研究的发展 以及二者之间相关关系的研究。 六、血糖、血压及血浆游离脂肪酸相关关系研究(第八章)。采 用多元线性回归和去一法交互检验等方法，发现并发高血压的患者游 离脂肪酸与血糖具有明显的线性关系。我们推测，并发高血压的患者， 脂代谢与糖代谢之间很可能存在直接的作用关系。 本论文将代谢组学研究技术与化学计量学紧密结合，对中药陈 皮、青皮及2型糖尿病进行了一些基础研究，充分展现了这种结合在 疾病诊断、药物的药效评价及中药质量控制等研究方面的优势及巨大 潜力。 关键词：代谢组学，化学计量学，模式识别，生物标记物，2型糖尿 病，橘皮次生代谢指纹图谱 ABSTRACT Metabolomicsisa scienceand postgenomic technologydeveloped inmid1990s．Itseeksto a ofthe providecomprehensivepro