21-羟化酶缺乏症CYP21基因编码区突变谱分析.pdf

21一羟化酶缺乏症CYP21基因编码区突变谱的研究 中文详细摘要 赣究鸷爨与曩熬先天经弩上腺皮囊嫒生痘(CAH)是～类较鬻见熬遗 传代谢性疾病，90％～95％由21一羟化酶缺陷所致，临床表现与21一羟化酶的 映乏程凌鸯关，分三耪妥黧：①失釜鍪； ②荤缝舅毪德蓬，渡主二耆嚣 于经典型； ③隐隧迟发型。又称非经典型。2卜羟化酶主要存在肾上腺皮 质中，不挠通过盎渡或其德缱织直接分祈黼的潘校，僵其活性降低会导致 17一羟孕酮的堆积，因此临床主要憩应用生化方法梭测患者_舡17一羧孕酮的 水平进行诊断。21-羟化酶由CYP21基因编码，该熬因突交可引起2卜羟他 酶不网程度灼缺乏，从两产生一系列临床痰状。零硪究通过对CYP21基嚣 突变的检测，以期了解CYP21基因编码区的常见突变谱和突变热点，并分 掇鏊毽型秘躲瘴表黧獒稳关经，麸分子遗转学热爱深入探讨21-羧纯酶缺 乏瘾的发病机制。 研究方法(1)磷究对象毯话53饲CAH患者及部分惠嚣家系辛72锈家 系成员，抽取静脉巍，从自细胞中抽提基因组DNA。(2)用簿位基因特异性 分攒鉴定。(3)设计特异性弓l物通过PCR扩增涎个掇嚣重叠的CYP21基困片 段，并用EcoRI限制性内切酶鉴别扩增片段的特辩性。(4)在第一次PCR 豹纂硝上进程巢式PCR扩攒，矮跟制牲冀段长疫多态瞧(RFLP)瓣方法梭 A 测P30L、129、E3 CYP21基因突变的纂因型和突变的频率分布，并按照突变对酶活性的影响 程度将CAll患者分成不同静组剐，院较预期的临床表型和实际的晒床表 型，以分析旗因型和临床表趔的相关键。 CAH患者中商9援力缺失，其中3铡必缝台子，6壤为杂台予。劳翅越方法 对香港中文大学提供的CYP21基因缺失标本进行分析，获得了一致的结 象。(2)矮PCR豹方法扩增嚣令相互灌叠匏CYP21蒸鬻片凌，遗遘酶纫签定 子)，24例患者携带2种或2种以上的突变。(4)通过家系分析，获得了 中国人CAH患者CYP21基因突变的基因型和突变的频率分布。最常见的突 变为129，其突变频率为29．4％，其他的突变频率分别为1172N 等位基因的频率为9．8％。通过基因型和临床表型的相关性分析发现：失盐 单纯型最常见的为1172N和129，分别占42．6％和16．7％。 结论(1)用经过改良的等位基因特异性PCR不仅能够定性的检测CYP21 基因缺失纯合子，而且也能通过定性检测杂合子。与文献报道的RFLP检测 缺失的方法比较，更为直观、简便。(2)以PCR为基础的二步分析法，是一 变的基因型和临床表型的关系，对今后的遗传咨询、基因诊断和产前诊断 有一定的指导作用。 关键词 先天性肾上腺皮质增生症CYP21基因基因突变等位基因 RFLP 特异性PCR ACRS基因型 in Gene on ofCYP21 Mutations CodingRegion Analysi8 with Defioiency 21一Hydroxyl050 patients iI edAbstraot Deta and adrenal Congenital Objective Background recessivedisorder from is a co