波形蛋白在胶质瘢痕形成中的作用__--__利用反义及其正义波形蛋白逆转录病毒分析.pdf

波形蛋白在胶质瘢痕形成中的作用 一利用反义及正义波形蛋白逆转录病毒的研究 摘 要 nervous 多种刺激或损伤作用于成年哺乳动物中枢神经系统(central system)，导致一系列复杂的细胞和分子事件，这些事件表明机体试图修复 脑或脊髓的损伤区域。{早在1928年，Cajal就注意到，损伤后的周围神经 系统能够成功愈合，而成年CNS由于损伤的轴突不能再生，导致持续的功 能障碍。反应性胶质化(reactive gliosis)是这些事件的基本病理表现， 以胶质细胞胞核、胞体和突起肿胀，胶质细胞增生甚至肥大为特征。反应 性胶质化的过程是胶质细胞维持神经元微环境稳定的过程，增殖的星形胶 质细胞(astrocyte，Ast)参与损伤部位的髓磷脂和神经元碎屑的清除，包 绕损伤区域，控制细胞外间隙的各种离子、神经递质、营养因子、代谢产 物的含量等。因而，它对于损伤修复是必要的，但持续的胶质反应将导致 损伤部位致密的胶质瘢痕形成。长期以来，胶质瘢痕被认为阻碍了轴突再 生。迄今，有关胶质化及胶质瘢痕的机理仍不清楚力星形胶质细胞是反应 性胶质化涉及的最主要细胞。成年CNS的不同部位损伤发现，损伤后的一 定时间和范围内，反应性星形胶质细胞不仅增强表达中间丝胶质纤维酸性 acidic fibrillary 蛋白(glial protein，GFAP)，而且另一种只主要表达于发育期 成中可能有重要作用，两种中间丝之间可能存在一定的联系。(以往的研究 多集中于GFAP，对Vim较少关注，更缺乏系统深入的研究；：卜我们利用成 年大鼠脑剌伤模型，较全面描述了Vim的表达。在此基础上，研究了Ast 可分泌的睫状神经营养因子(ciliary factor，CNTF)对反应性 neurotrophic VlI 胶质化的影响：再利用重组Vim反义和正义逆转录病毒，通过离体和在体 研究，进一步阐明Vim在胶质瘢痕形成中的作用及其与GFAP表达的关系。 ＼研究结果如下： 1．脑刺伤后的Vim表达 脑刺伤后的RT—PCR显示紧邻伤道的Vim RNA增加显著：皮质分子 层、胼胝体、海马的伤道周围出现Vim免疫反应阳性细胞，细胞胞浆和突 起均着色，阳性细胞主要出现在伤道附近。同时，GFAP染色的反应性胶 质细胞除在相应的Vim染色部位外，还在离伤道较远的距离出现，较正常 的Ast数量明显增多，且胞体增大，突起增多、延长，染色加深。1w时Vim 上述变化进一步加强，开始形成胶质瘢痕，4w即见伤道周围形成致密的大 量突起相互交织成致密的胶质瘢痕；流式细胞仪细胞记数显示Vim(+) 细胞显著增加。 2．CNTF对胶质瘢痕的作用 在体研究发现，重组CNTF能够显著增加反应性胶质化时的GFAP表 达，呈量效关系，并影响到远离损伤部位的对侧GFAP表达。离体研究发 现，CNTF增强Ast的Vim和GFAP表达，但可能不是通过细胞内游离钙 离子(fCa2+]i)的升高起作用。 3．V I l m逆转录病毒对NH3T3细胞和神经干细胞的影响 3．1 NIH3T3细胞胞体失去典型的梭形，突起回缩变短；与此变化相反，Vim 正义逆转录病毒pLXSN／s．vim使NIH3T3细胞突起长，容易与相邻突起形 成网络。 3．2经Vim反义逆转录病毒感染，表达Vim的神经干细胞集落分化 的胶质细胞突胞体小、起较短，生长缓慢：而Vim正义逆转录病毒感染神 经干细胞后，分化的胶质细胞胞体大，突起较长，生长迅速。 4．Vi m逆转录病毒对反应性胶质化和胶质瘢痕的作用 4．1离体实验 4．1．1Ⅵm反义逆转录病毒感染划伤的Ast后，见Ast的胞体缩小，突 vIll 起短，细胞生长增殖