肠源性内毒素血症在肝炎慢性化中的作用及有关机制分析.pdf

博t啼}文2加2 肠源性内毒素血症在肝炎慢性化中 的作用及其有关机制的研究 博士生 刘近春 导师 韩德五 摘 要 肝病的发生发展中常常伴有肠源性内毒素血症(intestinal 之一。反复与持续的炎症反应与进而发生的IETM刺激枯否细胞，所释放 的诸多细胞因子、炎性介质、自由基、一氧化氮(NO)与内皮素一1(ET—1) 而引起的肝细胞损害、炎症反应及肝微循环紊乱，是肝炎慢性化的基础。 我们以往的研究表明内毒素参与了肝纤维化的形成与发展，但对其机制仍 有待于深入的研究。 本研究共分三部分：(一)肠源性内毒素血症与肝纤维化；(二)NO在 LPS诱发肝硬化大鼠发生肝功能衰竭中的作用：(三)抑制LPS生物学效应 对肝炎慢性化的作用。 f第一部分研究目的是：①观察内毒素血症在致肝纤维化形成的过程中 诱发的促炎、促纤维化因子(肿瘤坏死因子．Ⅸ)和抗炎、抗纤维化因子(白 细胞介素-lO)问的动态变化，进一步探讨肝纤维化形成的机制。②探讨 内源性N0及其反应产物过氧亚硝酸阴离子(ON00一)以及外源性N0对肝微 循环障碍的影响在肝纤维化发生发展中的作用。 在实验一将大鼠分成；①正常对照组：饲以普通饮食；②肝纤维化组： 采用复合因素致肝纤维化动物模型，分别于实验2，4，8周末取大鼠进行 实验，观察血浆内毒素、TNF吨、IL．10及肝组织胶原蛋白含量的变化、肝 脏组织学改变和肝脏TNF-嘏．1L．10mRNA的表达。结果表明，血浆内毒 素水平各实验组均明显高于正常对照组，且随着肝纤维化的加重内毒素水 平逐渐升高；血浆TNF—a水平在4周末组和8周末组明显高于正常组和2 周末组，也随肝纤维化的发生发展而逐渐增加；血浆IL．10水平各实验组 均明显高于正常对照组。但以4周末组最高。8周末几一lO水平下降，与2 周末组相接近；肝组织胶原蛋白含量随肝纤维化的加重而逐渐增高，4周 末组和8周末组明显高于正常组和2周末组。血浆内毒素水平分别与TNF吨 水平和肝组织胶原蛋白含量呈正相关(分别为：r=0．797。Po．Ol；r：o．903， P0．01)；TNF飞与胶原蛋白含量呈正相关(F0．885。P‘0．01)。肝组织学 显示：4周末组炎症反应明显，而8周末组炎症反应较轻。上述结果表明， 肝纤维化发生发展中伴有IETM，内毒素通过激活枯否细胞释放促炎、促 纤维化因子(如TNF飞)，同时在纤维化早期由于炎症反应明显，使抗炎、 抗纤维化因子(如m-10)释放增加，随病变进展炎症反应减轻以及TNF-值 的持续增高，使IL-lO水平下降，促进肝纤维化的发展。因此，IETM促 进肝纤维化发生发展的机制与促炎、促纤维化因子和抗炎、抗纤维化因子 之间失衡有关。 在实验二将大鼠分为4组：①control：正常对照组，以正常饮食喂 养；②职：肝纤维化对照组，仍采用复合因素致肝纤维化模型，同时用 生理盐水1．5ml·只。1·d-I灌胃；③HF+Arg：以肝纤维化对照组为基础， 予LNNA20mg·Zg-1·d-1灌胃。于实验4周末，观察血浆内毒索、NO、丙二 醛(啪A)和超氧化物歧化酶(SOD)水平；观察各组肝组织纤维增生程度 2 7、 坐!苎竺查竺 竺竺查!竺三一——一 及免疫组化检测肝组织NT的表达；用台盼蓝原位灌流肝脏来观察肝脏微 循环的改变。结果表明血浆内毒素水平在}iF组和HF+NNA组均明显高于 No水平以HF+Arg组最高，明显高于其它各组，而HF+NNA组最低，明显低 于其它各组，腰组明显高于control组；血浆MDA水平各实验组均明显高 低于control组和llF+^rg组：肝脏纤维组织目标面积各实验组均明显大 在}IF组表达最强，HF+NN^组表达最弱；用台盼蓝原位灌流肝脏发现HF组 灌流时间最长，耶十Arg组与control组比较差异无显著性。结果表明，内 毒素刺激iNOS表达增强，内源性N0的合成与释放增加，内毒素还使肝内