副猪嗜血杆菌和猪传染性胸膜肺炎放线杆菌双重PCR检测方法的建立及应用.pdfVIP

动物医学进展 ，2013，34(12)：29-33 ProgressinVeterinaryM edicine 副猪嗜血杆菌和猪传染性胸膜肺炎 放线杆菌双重 PCR检测方法的建立及应用 余远迪 ，曾 泽 ，岳 华 ，张 斌 (西南民族大学生命科学与技术学院，四JIl成都 610041) 摘 要：针对副猪嗜血杆菌(Hps)16SrRNA序列和猪传染性胸膜放线杆菌 (App)ApxlVA 基因序列各设 计一对引物，分别能扩增大小为822bp和 346bp的 目的基因片段 ，建立快速鉴定 Hps和 App的双重 PCR方 法。特异性试验表明，该方法对波氏杆菌、巴氏杆菌、大肠埃希菌、沙门菌、金黄色葡萄球菌、猪圆环病毒 2型、 猪流感病毒 、猪繁殖与呼吸综合征病毒的扩增结果均为阴性。敏感性试验表明，该方法与单项PCR的敏感性一 致 ，最低可检测核酸浓度 Hps38pg／mL，App3．8pg／mL~最低检测细菌含量 Hps8．9c{u，App26．9cfu。利用 该方法检测 Hps和 App参考菌株 、临床分离株 、36份临床肺组织样本和人工感染的猪肺组织样本。结果显示， 该方法对参考菌株和临床分离株全部检出，36份临床样本中检 出Hps18份，App为阴性，与单项PCR检测结 果一致，人工感染组织样本也均能检 出。表明该方法适用于 Hps和 App的临床快速检测。 关键词 ：副猪嗜血杆菌；猪传染性胸膜放线杆菌；双重 PCR方法 中图分类号 ：$852．619 文献标识码 ：A 文章编号 ：1007—5038(2013)12—0029—05 副猪 嗜血杆菌 (Haemophilusparasuis，Hps)是 感性试验，建立了可快速鉴别检测副猪嗜血杆菌和猪 普通猪上呼吸道的一种共栖菌 ，能在特定条件下侵入 传染性胸膜放线杆菌的双重 PCR方法。 机体而引起严重的全身性疾病 ，以纤维素性多发性浆 1 材料与方法 膜炎、关节 炎和脑膜炎为特征。主要 临诊症状为发 1．1 材料 热、咳嗽、呼吸困难 、消瘦、跛行 、共济失调和被毛粗乱 1．1．1 菌株 与毒株 Hps菌 株参考血 清 1型 等 ，剖检病理变化表现为胸膜炎、肺炎、心包炎、腹膜 (HS82)、2型 (HS83)、3型 (H$81)、4型 (H$79)、5型 炎、关节炎和脑膜炎等 ；主要危害 2周龄～8周龄的仔 (HS80)、6型 (HSLO72)、7型 (HSLO73)、8 型 猪 ，发病率一般为 10 ～15 ，病死率可达 5O 以 (HS1073)、9 型 (H$50)、10型 (H$1076)、11型 上_I]。猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacilluspleuro- (HSLO77)、12型 (HSLO75)、13型 (HSLO79)、14型 pneumoniae，App)是猪传染性胸膜肺炎 (Porcinein～ (HS1080)、15型 (HSLO81)、10o株 Hps临床分离株 fectiouspleuropneumonia)的致病菌 ，以急性出血和慢 (swuN050～SWUN151)，App参考菌株血清 1型 性纤维素性坏死性胸膜炎病变为主要特征，慢性症状 (CVCC259)、血 清 2 型 (CVCC260)、血 清 3型 表现为可造成猪生长缓慢的肺损伤 ，给世界各地养猪 (CVCC261)、血 清 4型 (CVCC262)、血 清 5型 业造成严重经济损失口]。在临床诊断中，很难通过临 (CVCC263)、血 清 6 型 (CVCC264)、血 清 7型 床症状和病理特征鉴别这两种疾病 的混合感染。而 (CVCC265)、血 清 8型 (CVCC266)、血 清 9型 传统的鉴别诊断方法，即病原分离和血清学诊断，由 (CVCC267)、血 清 lO型 (CVCC268)、血 清 11型 于敏感性和特异性不高 ，不能满足快速鉴别诊断的需