黑素瘤与色素痣BRAF、NRAS基因突变研究和黑素瘤血清microRNA肿瘤标志物的分析.pdfVIP

·中文论著摘要· 黑素瘤和色素痣中BRAF、NRAS基因突变分析与黑素 瘤血清microRNA肿瘤标志物研究 盲fr吉 莉 昌 nevi，Mm分 恶性黑素瘤(malignantmelanoma，MM)及色素痣(melanocytic 别是黑素细胞性皮损的恶性及良性形式的典型代表。皮肤MM的发生率在不同人 种间存在较大差异，以高加索人罹患率最高，东方人种次之，黑色人种最低。MN 可以全身发生，高加索人发生频率高于亚洲及非洲有色人种。MN的发生也与年 龄相关，一些病例发生在儿童期，但发生高峰多在30．40岁期间，然后随年龄增 长发病率渐回落。 BR,4F是RAF家族成员之一，是RAS丝裂原活化蛋白激酶信号传导途径 TI 也有证据表明MN也存在BRAF799A突变，其频率高达80％。关于BRAF T1799A突变在MM发生发展过程中的真正角色，仍留有疑问。 临床数据显示，日光，尤其是紫外线(ultraviolet light，UV)是引起MM或 MN的最重要因素之一。来自于浅肤色的几个不同人群的研究显示间断性紫外线 暴露与MM和MN中的BRAF突变显著相关。然而，紫外线暴露对于MM或MN 发生的影响力可能受到不同皮肤类型和颜色的影响。 除在原发性MM中检测引叫跌变外，更为广泛深入的研究也拓展到各类黑素 中存在BRA族变。同时也有来自蓝痣及粘膜MM的报道。 本研究收集了中国MM及MN标本，分析了BRAF突变发生规律。出乎意料 的是，我们第一阶段的研究结果提示大量含有BRAF热点突变【第15外显子T1799A 鲜有该热点突变，不支持BRAF突变是MM发生发展的关键因素。 目前，西方发达国家已经开发出针对BRA族变的药物并应用于临床治疗。然 而，在具有曰剐脯频突变的西方群体中，此类药物也未达到理想效果。提示围绕 BRA胰变的治疗可能达不到预期目的。BRA腆变的生物学意义还有待商榷。早 期诊断是提高存活率的最有效途径，早期发现皮损并移除可以拯救90％的患者。 相反，随着疾病进展，5年存活率大大下降：ll期发现的患者5年存活率为60％，III 期则下降到lO％；一旦转移，平均5年存活率仅为5％。 功能性mRNA3’端非编码区的非完全碱基配对来抑制相应mRNA的功能，发挥调 节细胞分化、增殖或凋亡的作用。很有特点的是，50％的miRNA基因均定位于基 因组上癌症基因相关区域。与正常组织相比较，在肿瘤中已经发现有差异表达的 miRNA。数据显示，循环中存在来源于各种不同免疫细胞、组织或器官的miRNAs。 数据显示循环体液中的miRNA可以抵抗非常极端的储存条件如存在RNaseA酶、 煮沸、极端酸碱性储存液、延长存储时间及多次反复冻融等而依然保持稳定，为 研究miRNA作为不同生理病理过程的基因标志奠定了基础。多篇报道指出血清 miRNAs可以作为癌肿、炎症或心血管等疾病的检测标志。 因此本小组将工作重心转移到寻找血清miRNA肿瘤标志物的方向中来。我们 首先在小鼠黑素瘤模型中进行了初探。数据提示miR．103仅在MlVl小鼠血清可以 检测得到，而正常血清中则丰度极低(见第二部分)；同时初步检测到在MM组 小鼠和对照组血清问有差异表达miRNAs。强烈提示血清中可能存在MM肿瘤相 关的miRNA，并可以用做区分标志。 随即我们继续在MM患者血清里开始了同样的研究。可喜的是我们在MM血 清中寻找到数个差异表达基因，部分表现为表达水平上的显著性差异，另一部分 甚至在正常标本检测不到，而仅在MM血清特异表达的miRNA。经统计分析，数 个miRNAs在区分MM与健康标本方面有较高的敏感性和特异性，极有潜力用作 肿瘤标志物。 尽管我们采用了年龄、性别无差异的34例MM和34例健康对照的相对大样 本，该样本量仍不足以诠释候选miRNAs的表达与诸多不同MM病理类型和不同 2 分期之间的关系。该研究结果还需要通过引入含有更多变量的更大规模样本进一 步验证。而目前血清数据只能依赖高通量miRNA