马立克氏病病毒类白细胞介素8基因表达及其生物学特性的分析.pdf

张鑫字MDVvIL．8基因表达及生物学特性研究 中文摘要 马立克氏病病毒(MDv)是一种致T细胞瘤的疱疹病毒，然而病毒的致肿瘤 能扩增出相应片段。将扩增出的基因片段克隆进载体pGEM—Teasy中，构建成 果表明，vlL一8基因在I型马立克氏病病毒基因组中为一高度保守序列，提示该序 列可用于MDVI型病毒的鉴定。 I及EcoRI酶切好的原核表达载体 I酶切消化pT．vlL8质粒，然后插入经BamH 融合蛋白，说明融合表达性质粒pGEX—vIL8构建正确。表达产物活性分析发现， vlL一8基因重组产物具有趋化鸡外周血淋巴细胞的活性，这一结果提示MDV在感 染过程中，vlL一8吸引易感细胞，促进病毒感染，并可能参与了肿瘤的扩散和发展。 pcvlL一8，将其转染宿主细胞COS．1，取转染48小时后的细胞培养上清做趋化试验， 试验结果证明COS．1细胞表达了vlL一8多肽，细胞上清有明显的趋化活性，且滴 度高达105。 细胞因子往往具有免疫调节作用，尤其在基因免疫过程中，该作用更为明显。 DNA 为了弄清病毒编码的vlL8是否也具有免疫调节作用，本研究将转染pcvlL．8 的COS一1细胞培养上清与人0型血红细胞(RBC)混合，腹腔免疫注射小鼠，同时 设立对照，测定在含有vlL．8的情况下，小鼠对人0型RBC的抗体反应性。通过计 算抗体积数，t检验分析不同处理组的差异性。实验结果表明，小鼠抗O型RBC 的抗体滴度在实验组与对照组差异不显著，这一结果提示，vlL一8对肌体体液免疫 无明显的调节作用；为进一步证明这样的结论，我们用同样的设计，采用不同的 基因真核表达载体(pcALV．Jenv)联合基因免疫5日龄鸡，分别间隔lO天采血、 塑矍盔兰矍查兰垒笙苎 一——一2 分离盘滇，雳阕接受疫荧光法检测挠俸滚度。苏periL-8摆矮粒与黼活疫蓥联合 免疫雏鸡。试验结果表明，试验组与对照组抗体滴度无显著荔异，这些结果表明， 上述免疫途径簸方法船入辩vlL一8，对梳体俸液免疫无疆显静调节依雳，然而透过 其它途径能否对机体免疫有调节作用还裔特进一步的研究。 关键词：马立克氏病病毒；病毒类白细胞介素8；序歹0分祈；表达；趋化性；兔 疫源性；免疫调节 vlL-8基嚣表达叠生物学特性耩究 3 张鑫字MDV 8 ofviralinterleukin Expression gene diseasevirusandits Marek’s of biological M．S．Candidate：XinyuZhang Qin Supervisor：Prof．Aijian disease a whichinducesthetumor Abstract：Marek’S virus(MDV)isherpesvirus unclear．In in its mechanismisstill this chickens，However ofTcells oncogenic