近红外核壳荧光纳米颗粒的生化分析应用和新型压电免疫传感器研究.pdf

近红外核壳荧光纳米颗粒的生化分析应用及新型压电免疫传感器研究 (3)结合运用连接酶反应和核壳型荧光纳米颗粒，提出了一种基于荧光各向 异性技术与DNA连接酶的高保真性的检测方法，用予单碱基突变的直接检测。该 方法使用一个等位特异的识别探针和一个普通的探针，这两条探针都标记在荧光 纳米颗粒的表面。当这两条DNA探针与目标链发生杂交反应时，就引起荧光纳米 颗粒的凝集，从而引起荧光探针的荧光各向异性值的增加。当识别探针3’端的碱 基与目标链完全匹配时，DNA连接酶就会把这两条探针之间的缺口封闭，反之， 当识别探针3’端的碱基与目标链不匹配时，缺口就不能被封闭。对于不匹配的情 况，当加热解链形成的双链时，凝集的荧光纳米颗粒就会彼此分开，溶液的荧光 各向异性值将恢复到初始值；而对于完全匹配的情况，溶液的荧光各向异性值仍 保持纳米粒子团聚后的值。因此，通过灵敏的荧光各向异性检测就能很好地实现 单碱基突变的检测。用该方法对结肠癌k．rag基因的第12位密码子的突变情况进 行了检测，使突变型和野生型得到了很好的区分。 (4)结合本实验室在基因单碱基突变检测技术方面已有的研究成果，利用 核酸修饰纳米金的这一凝集变色特性，提出了一种新的等温滚环扩增反应的检测 方法，并用于人D地中海贫血基因一28位点的点突变灵敏定量检测。该方法能够区 分突变的杂合子或纯合子，为DNA目标链单碱基突变的I临床医学诊断提供了一种新 的途径。 本论文的余下部分报告有关新型压电免疫传感器的研究成果。针对当前免疫 传感器传感界面构建研究中存在的问题，在实验室原有工作的基础上，以压电石 英晶体微天平为换能器，结合自组装膜技术、纳米生物修饰技术及聚电解质吸附 组装技术，设计了一系列免疫活性材料固定化新方法，以期提高压电免疫传感技 术用于临床实际诊断的可行性。同时，由于压电石英晶体微天平很难实现对小分 子物质的直接检测，所以利用大分子亲和素与生物素之间的亲和力，设计了一种 石英晶体微天平实现对小分子生物索的检测的方法。 (5)结合电聚合膜和纳米金自组装技术，提出了一种新的生物分子固定化方 法，研制成一种检测抗胰蛋白酶的压电免疫传感器。通过在石英晶振金电极表面 电聚合邻苯二胺膜，再在膜表面自组装一层纳米金粒，以静电吸附作用固定抗体 (抗原)，实现对相应抗原(抗体)的检测。利用扫描电镜技术，从形态上考察了 晶振金电极上自组装纳米金后的表面形貌。考察了抗体的固定化条件，探讨了传 感器的响应与再生性能。结果表明，这种固定化方法对所固定的生物分子的生物 活性影响小，传感器的测定灵敏度高，响应性能表!再生性能较好。 (6)基于Nation膜界面构建了一种石英晶体微天平免疫传感器，用于血清 中补体C4的检测。Nation膜界面的表面形貌通过扫描电子显微镜进行表征。考察 了抗体静电吸附过程，抗体固定的最佳条件以及免疫反应过程，所构建的免疫传 感器测定补体C4的线性浓度范围为0．08．1．6 pg／mL，检测相对标准偏差低于5_3 ⅡI 博士学位论文 ％。该传感器制作简便，也易于使用后再生。 (7)通过带相反电荷聚电解质可交替吸附的自组装技术，研制了一种新型的 生物传感界面。在压电石英晶体微天平(QCM)的金电极表面，修饰巯基乙酸 具有双面胶功能的带正电荷的壳聚糖分子连接带负电荷的褐藻酸钠．HSA抗体分 子到负电性的MAA--SAM层。并实时考察了传感界面的组装过程和组装条件， 运用原子力显微镜(AFM)考察了每层组装膜的表面形貌。与传统的抗体直接固 定方法相比，本文提出的新型免疫传感技术能很好地保持抗体的活性，使灵敏度 显著提高，也使传感器检测的线性范围明显变宽。尤其这种传感器具有简便而快 速的再生性能。因此这种新的生物传感界面，在开发新的生物传感器件上具有潜 在的优势。 (8)结合自组装技术和聚电解质间的静电吸附作用，在石英晶振的金电极表 面构建了半胱胺自组装膜和壳聚糖／褐藻酸钠相反电荷聚电解质的多层自组装膜 的传感界面，研制成一种检测人血清中B因子的压电免疫传感器。考察了标记抗 体的固定化条件，探讨了传感器的响应与再生性能。与戊二醛共价交联固定方法 相比较，这种优化的固定化方法所获得的传感器响应的频移值大，检测限低。检 测范围宽，灵敏度高，传感器能够简便地实现再生。而且这种固定化方