普通小麦春化基因的克隆及其表达特性分析.pdf

普通小麦春化基因的克隆和表达特性分析 摘 要 小麦的春化特性是决定小麦种植区划、引种用种及栽培技术的重要因素之一，小麦品种 冬春性的强弱直接影响到小麦的穗分化进程及其对低温冻害的耐受能力，开展小麦春化分子 调控机理的研究具有重要的理论和实践意义。本研究以具有不同春化特性的9个代表性小麦 品种为试验材料，系统分析了它们的发育特性、春化基因组成及表达特性，主要研究结果如 下： 1、小麦春化基因隙?、7：z的组成与春化发育特性 在供试的9个品种中，低温春化处理在不同程度上均可缩短小麦的幼穗分化进程和苗穗 期，且小麦品种的春性越强，其对低温的敏感性越低，冬性越强则对低温春化的敏感性越高。 变异系数在25％～32％之间，为冬性品种，肥麦的冬性最强。通过基因组特异性PCR鉴定及 序列分析，小麦品种的春化发育特性与春化基因Vrnl的显隐性组成密切相关，当Vrn-A1、 矽锄名，和胁国J『均为显性时，品种的春化发育特性为强春性，低温春化效应极低；当Vrn-A1、 Vrn．B1和Vrn-D1为隐性时，品种的春化发育特性为半冬性到强冬性，低温春化效应从弱到强； 应表现为Vrn-AlVrn一口J跏2DJ的趋势，与品种的春性强弱趋势表现一致。 2、小麦春化基因凇Ⅳ7的克隆和表达特性 通过PCR特异扩增技术克隆了春化基因VRNl的cDNA片段，序列分析显示该基因的 A、B和D等位基因间有差异，B和D基因组差异较小，A基因组与B和D基因组差异较 大；VRNl基因在不同品种间差异较小，其序列有较高的保守性。通过特异性半定量RT．PCR 技术对VRNl的三个等位基因的表达特性分析显示，强春性品种(辽春10号)的3个等位 基因在1叶期(圆锥期)就有较低水平的表达，从3叶期(二棱期)开始保持高水平表达至 开花期；春性品种新春2号、弱春性品种豫麦18和郑麦9023中，均有一个显性等位基因(分 肥麦)中，三个等位基因均对低温春化高度敏感，低温春化的诱导效应具有 普通小麦春化基因的克隆和表达特性分析 密切相关，显性等位基因的表达启动较早，而隐性等位基因则较滞后；低温春化能够诱导 VRNl的表达；在通过春化阶段后VRNl维持高水平的表达，并一直持续至开花期。 3、小麦春化基因咫7、2的克隆和表达特性 示该基因可编码包含CCT结构域的功能蛋白，基因组结构分析发现该基因包含1个1249 bp-1449bp的内含子。表达特性分析显示，在强春性品种辽春10号中未检测到其表达；在 春性品种新春2号、弱春性品种豫麦18和郑麦9023中，只有1叶期(圆锥期)有表达；在其 它检测的半冬性和冬性品种中，VRN2基因的表达与VRNl的表达互为消长，即在通过春化阶 段以前表达，而在通过春阶段后则停止表达，停止表达时间与幼穗发育通过二棱期一致； VRN2基因的表达受低温春化的抑制，因此在普通小麦中，不需要春化(强春性品种)或当 春化发育阶段(春性、冬性品种)通过时，该基因即不表达或表达量极低。 4、小麦春化基因脉Ⅳ罗的序列特征和表达特性 对VRN3基因的克隆和序列分析显示，该基因在普通小麦中至少存在3个成员：其cDNA 序列分析显示该基因编码的蛋白属于磷脂结合蛋白(phospholipid—bindingproteins)家族成 员，基因组结构分析显示，该基因包含2个内含子，且内含子序列在品种间存在较大差异。 通过特异性半定量RT．PCR技术对VRN3的表达特性分析显示，VRN3的表达特性有三种类型： 即在圆锥期表达起始(辽春10号和豫麦18)；在伸长期或单棱期开始表达(新春2号、郑麦 明，所有品种VRN3的表达持续至开花期：低温诱导能够诱导或增强小麦VRN3的表达 5、小麦春化基因的时空表达特性 VRNl在小麦根、茎秆、叶片、花药、胚珠、发育过程的种子中均有不同水平的表达， 而在干种子和种子萌发过程中不表达，不过在冬性品种中该基因的表达特性受春化进程的影 响。VRN2的表达与小麦的春化进程密切相关，仅在小麦通过二棱期前的叶片中表达，而在 其它发育时期的叶片及其它组织中均未检测到其表达；VRN3的表达除了在根系中未检测到 外，其时空表达特性与VRNl相似。 从三个春化相关基因的表达特性来看，VRNl基因随小麦发育进程及低温诱导而表达， 冬性越强，促进表达所需要低温诱导的时间越长；VRN3的表达滞后于VRNl的表达，并与 VRNl有相同的表达趋势；VRN2基因在强春性品种中不表达，其它品种仅在幼穗分化通过 二棱