一、利用siRNA抑制HepG2和K562细胞cyclinD1表达对其生物学特性的影响二、甲异靛抗肿瘤作用及其机理研究.pdf

博士后出站报告 王一 第一部分 cyclinDl表达对其生物学特性影响的研究 缩略词 siRNA 小分子干扰RNA RNAi RNA干扰 dsRNA 双链RNA cyclinDl，CDl 细胞周期素D1 CDKs 细胞周期蛋白依赖激酶 Vpl6 鬼臼乙叉甙 Annexin—V 膜联蛋白一V PI 碘化丙啶 MTT 噻唑蓝 HepG2 人肝癌细胞株 K562 人髓系白血病细胞株 IU二PCR 逆转录聚合酶链反应 MMLV 鼠源逆转录酶 DEPC 焦碳酸二乙酯 Taq DNA聚合酶 博士后出站报告 王一 摘要 【背景l细胞周期素D1(CDl)是调控细胞周期的重要分子。CDl在 多数恶性肿瘤细胞中高表达，是影响肿瘤预后的独立因素，因此CDl 可能成为抗肿瘤治疗的靶点。RNA干扰因为对目的基因抑制作用的 高效性和特异性，而受到人们的高度关注。本研究采用siRNA方法 沉默肿瘤细胞中CDl的表达，并观察其相关生物学特性的改变。 【方法l按照RNAi靶点原则，设计出可能对CDl有干扰作用的序列， 体外合成发夹结构，并将其连接到含U6启动子的质粒PGE．1上。将 K562细胞中CDl表达抑制后，细胞周期的变化。筛选稳定转染质 导细胞凋亡情况的变化。 【结果】设计出4个可能干扰序列，按照PGE一1质粒的要求将其连接 mRNA 和蛋白水平表达均明显降低，HepG2和K562细胞CDl表达降低后， 1 博士后出站报告 王一 细胞凋亡。 高对Vpl6敏感性 D1：RNA干扰 cyclin 【关键词】HepG2细胞；K562细胞； 型趔堂 一 ————————————————————————————————————————————————————一 三二 Abstract an [Background]CyclinDl(CDl)wasincontrolcell