高氧肺损伤新生大鼠肺组织中肺表面活性物质相关蛋白-A(SP-A)的mRNA和蛋白表达及其布地奈德的干预作用.pdfVIP

高氧肺损伤新生大鼠肺组织中肺表面活性物质相关蛋白-A （SP-A ）的mRNA 和蛋白表达及布地奈德的干预作用 中文摘要 高氧肺损伤新生大鼠肺组织中肺表面活性物质相关 蛋白-A （SP-A ）的mRNA 和蛋白表达及 布地奈德的干预作用 中文摘要 目的： 1．建立新生大鼠高氧肺损伤的动物模型； 2 ．观察与比较高氧性损伤时新生大鼠肺组织的病理组织学改变，以及肺表面活 性物质相关蛋白-A （pulmonary surfactant protein-A，SP-A ）的mRNA 及其蛋白的表 达变化，从而探讨 SP-A 在新生大鼠高氧肺损伤发生、发展中可能的作用； 3 ．探讨吸入性糖皮质激素布地奈德（budesonide ，BUD ）是否通过调控 SP-A 的 表达从而发挥对高氧肺损伤的保护作用，为临床防治高氧肺损伤提供理论依据。 方法： 取 108 只出生 1 天内的新生 Sprague Dawley （SD）大鼠（雌雄不限）随机分成 三组：即 Ⅰ组：空气组 （对照组），Ⅱ组：高氧＋生理盐水组（高氧组），Ⅲ组：高 氧＋布地奈德组（干预组），每组 36 只。 Ⅰ组置于空气中；将 Ⅱ、Ⅲ组实验动物持续暴露于 90 ％～95 ％氧箱中，直至实 验结束。 Ⅱ组于每日雾化吸入 NS 10ml，Ⅲ组每日同一时间点吸入溶解 BUD 的等量 的NS(含 BUD 2mg) 。 设立实验后 3、7 和 14 天 3 个时间观测点，处死动物，行支气管肺泡灌洗，测定 灌洗液中蛋白含量；取肺组织，计算肺湿 /干重比；HE 染色观察组织病理学变化； Westen Blot 方法检测 SP-A 蛋白含量、RT-PCR 方法检测 SP-A mRNA 表达水平。 结果： 1．各组实验动物一般情况： Ⅰ组（空气组）中的实验动物在实验期间精神状态 佳、活动灵活，进食正常。Ⅱ组（高氧组）中的实验动物逐渐出现症状，表现皮毛无 光泽、精神萎靡、活动少, 脱氧后烦躁不安, 呼吸困难明显, 鼻尖发绀, 恢复供氧可逐 I 中文摘要 高氧肺损伤新生大鼠肺组织中肺表面活性物质相关蛋白-A （SP-A ）的mRNA 和蛋白表达及布地奈德的干预作用 渐缓解；Ⅲ组（干预组）中的实验动物情况介于前两者之间。 2 ．肺组织病理切片： Ⅰ组（空气组）实验动物肺组织病理切片见肺组织结构规 整，无炎症反应，肺泡大小、形态均一；Ⅱ组（高氧组） 高氧暴露 3d 后可见肺血管 扩张充血，肺泡腔内出现红细胞及炎性细胞，肺间隔断裂，肺泡腔扩大；高氧 7 天时， 炎性渗出、肺水肿、肺出血较前更加明显，部分肺间隔增宽变形，肺组织结构紊乱； 14 天时更为明显，肺组织结构紊乱，肺间隔重度增厚，出现明显纤维化改变，肺泡 发育受阻，肺泡数量明显减少、大小不一，肺泡腔明显增大, 部分肺泡融合，可见肺 大泡或肺不张。Ⅲ组（干预组）肺组织形态与结构改变较 II 组有明显减轻。 3. 肺组织湿/干重比值（W/D ）：实验 3 天、7 天时，Ⅱ组（高氧组）实验动物 肺组织湿/干重比值（W/D ）较 Ⅰ组（空气组）增高（P0.01 ），实验 14 天时，Ⅱ组 较 Ⅰ组升高更明显（P0.01 ），而Ⅲ组（干预组）与Ⅱ组相比，3 天、7 天、14 天的 比值均有明显下降（P0.01 ）。 4. 支气管肺泡灌洗液（BLAF ）中蛋白含量 （TP ）测定：实验 3 天、7 天和 14 天时Ⅱ组（高氧组）BLAF 中TP 均高于 Ⅰ组（空气组），差异有显著性意义（P0.01 ）； Ⅲ组 3 天时 BLAF 中TP 较 II 组降低（P0.05 ），7 天、14 天时明显降低（P0.01 ）。 5. 肺组织中 SP-A 蛋白表达水平的变化：Westen Blot 检查测定结果表明：与 I 组动物比较，II 组（高氧组）实验 3 天时 SP-A 蛋白表达明显增高（P0.01 ）；7 天、 14 天 SP-A 蛋白表达下降，1