抗猪链球菌卵黄抗体性质和壳聚糖纳米微粒制备地研究.pdf

ANDCmTOSAN QUALITIES PREn们脚ⅣESTUDY OF Y AGAINST STREPTOCOCCUSSUIS AThesis(or to Dissertation)Submitted Shaanxi ofScienceand University Technology inPartial Fulfillmentofthe for the of Requirement Degree Masterof Engineering By Han Fang Thesis Supervisor：Professor Hong--xin Song Xue Hai-yan May,2013 抗猪链球菌卵黄抗体的性质和壳聚糖纳米微粒 制备研究 摘要 猪链球菌病对养猪业发展造成极大危害，其中猪链球菌2型(SS2)为 人畜共患传染病，严重威胁公共卫生安全。目前，预防和治疗猪链球菌病的 主要方法是免疫接种和抗生素治疗，但是猪链球菌分群复杂，疫苗更新快， 对抗生素容易产生耐药性并存在肉制品中的抗生素残留问题。卵黄抗体 (IgY)不存在药物残留和耐药性的问题，是一种安全、高效、无公害的生 物制品，可替代抗生素用于猪链球菌病的日常预防。 本课题通过对猪链球菌2型(SS2)抗原活化扩培，制备免疫原，免疫 健康临产鸡，从高免鸡蛋中提取特异性IgY，研究了IgY的热、酸碱、胃蛋 白酶和胰蛋白酶稳定性以及亲和常数。为了提高IgY的耐胃酸及酶解稳定 性，制备载IgV壳聚糖纳米微粒并优化条件，对微粒进行表征及体外释放性 能研究。 SS2免疫原制备与特异性IgY的制备。SS2菌种经显微镜镜检，活化扩 培，茵落平板计数得菌体浓度为3．4x 体抗原。菌体抗原与佐剂混合制成免疫原，免疫健康临产鸡，经4次免疫后， 收集免疫后的高免鸡蛋(测得ELISA效价1：6400)。从高免鸡蛋中分离卵黄， 采用水稀释冻融法、微滤、超滤、盐析、透析、亲和层析等纯化方法，得到 IgY亲和层析样品，考马斯亮蓝G．250法检测得该IgY样品的蛋白质含量为 效价为1：6400。 碱、胃蛋白酶和胰蛋白酶稳定性以及亲和常数，结果表明：在温度低于60 ℃及pH 4h后，IgY的活性保留率仅为9．3％，表明IgY易被胃蛋白酶分解；在模拟 载IgY壳聚糖纳米微粒的制备、表征及体外释放性能检测。以三聚磷 酸钠为交联剂，采用离子交联法制备载IgY壳聚糖纳米微粒，单因素试验结 的包封率降低而载药量提高。以IgY的包封率和载药量为考察指标，应用星 点试验设计对壳聚糖溶液的质量浓度、壳聚糖与三聚磷酸钠质量比和IgY的 质量浓