整合素β4基因变异及其表达缺陷和哮喘易感性相关分析.pdfVIP

摘 要 目的：整合素(integrins)是一类普遍存在于细胞表面的跨膜糖蛋 白。支气管上皮细胞构成气道的上皮屏障，其结构稳定性的维持，依 赖于细胞表达的整合素分子与细胞外基质蛋白形成异源粘附，将细胞 “锚定”于基膜上。同时，在气道高反应或气道炎症发生过程中，部分 整合素亚单位及其配体还参与了炎症细胞的移行和活化，使气道结构 和完整性遭到破坏，气道上皮剥脱。本室的前期研究己证实哮喘患者 134在所有哮喘病人检测样本中 多个粘附分子表达异常，其中integrin 均表达下调。那么，integrin134的表达失平衡在哮喘易感人群中是否 具有普遍性；它的异常表达机制是什么；integrinp4的表达失平衡与 哮喘的发生发展过程是否具有密切关系。本课题将围绕这一研究目 的，通过哮喘实验动物模型和临床诊断哮喘患者这两方面设计实验来 开展研究。 方法： 134表达与哮喘的相 一、建立哮喘动物模型，检测integrin 关性。 照组(n=6)。其中哮喘组分别于第1天、第13天经腹腔注射10％ rnj，14 OVA和10％氢氧化铝混合液1 d后用1％OVA溶液雾化吸入 d。对照组用等量生理盐水代替。 诱喘，每天1次，每次30min，连续7 2．利用小动物呼吸机和Buxco小动物呼吸功能分析系统，测定气 道阻力和动态肺顺应性； 3．收集肺泡灌洗液中细胞，涂片吉姆萨染色后进行细胞计数及分类。 T 4．无菌条件下取肺组织，进行肺组织切片检查。 5．肺组织切片免疫组化观察Integrin134在对照组和正常组支气管 上皮细胞、基底细胞、肺泡上皮细胞、血管内皮细胞表达变化。 6．Trizol提取肺组织中RNA，Real—time PCR反应观察Integrin134 在对照组和正常组表达变化。 二、临床哮喘患者integrin134表达与哮喘的相关性及机制探讨 行荧光定量PCR检测integrin 134表达。 2．提取哮喘患者外周血白细胞DNA，应用PCR法扩增哮喘患者 外周血白细胞integrin134基因5’调控区，进行正反双向测序及序列变 异分析。 结果：一、Integrin134在哮喘动物模型中的表达与哮喘的相关性 1、哮喘模型组激发前后气道阻力RL增加的百分比和动态肺顺应 性Cdyn降低的百分比均为对照组的2倍左右。 2、哮喘模型组细胞总数及嗜酸性细胞、中性粒细胞比例均高于 正常对照组。 3、哮喘模型组大鼠存在明显支气管收缩征象及周围炎症细胞浸 润，小血管周围、肺泡腔、肺间质大量炎细胞浸润，并可见支气管上 皮细胞脱落，肺动静脉周围水肿及呼吸性细支气管阻塞。正常对照组 无此变化。以上结果证实哮喘动物模型的成功建立。 4、免疫组化显示Integrin134在支气管上皮细胞、基底细胞、肺 II 泡上皮细胞、血管内皮细胞均有较高表达，在哮喘模型大鼠中表达下 降。 5、Real．time PCR反应测定哮喘模型大鼠Integrin134表达下调。 二-、临床哮喘患者integrin134表达与哮喘的相关性及机制探讨 1、Real．time 白细胞中表达下调。 2、哮喘患者外周血白细胞Integrin阳5’调控区基因序列存在变 异。哮喘患者的．ntl029、．nt 1 G，．nt164由G突变为C，提示哮喘患者5’调控区存在基因突变， 该突变可z日．匕l-,与Integrin134的表达下调有关。 134表达下调与哮喘高度相关，并与5’调控区基因序 结论：Integrin 列