鼠伤寒沙门氏菌EF--Tu蛋白和宿主(THP--1)蛋白相互作用筛选、验证及功能地研究.pdfVIP

符号说明 万方数据 万方数据 目录 中文摘要………………………………………………………………………………………．I Abstract………………………………………………………………………………．．…………………………………．110r 1弓I言………………………………………………………………………………………………………………………．．1 1．1沙门氏菌…………………………………………………………………………………．．1 1．2鼠伤寒沙门氏菌…………………………………………………………………………．．3 1．3鼠伤寒沙门氏菌引起宿主的免疫反应…………………………………………………．．3 1．4鼠伤寒沙门氏菌的毒力因子……………………………………………………………。5 1．4．1外膜蛋白…………………………………………………………………………………5 1．4．2沙门氏菌鞭毛……………………………………………………………………………5 1．4．3脂多糖……………………………………………………………………………………6 1．4．5肠毒素……………………………………………………………………………………7 1．5EF．Tu蛋白的相关研究……………………………………………………………………8 1．6研究目的与意义…………………………………………………………………………。9 2材料与方法…………………………………………………………………………………．9 2．1实验材料…………………………………………………………………………………。9 2．1．1实验动物、载体和菌株…………………………………………………………………9 2．1．2主要仪器设备……………………………………………………………………………9 2．1．3主要试剂………………………………………………………………………………．．10 2．1．4培养基及主要试剂的配制……………………………………………………………．11 2．2实验方法…………………………………………………………………………………11 2．2．1构建EF．Tu蛋白原核表达质粒………………………………………………………．11 2．2．3 EF．Tu单克隆抗体的制备……………………………………………………………．．21 万方数据 2．2．4 EF．Tu在鼠伤寒沙门氏菌的表面定位………………………………………………。24 2．2．6质谱分析………………………………………………………………………………．26 2．2．7相互作用蛋白的验证…………………………………………………………………．26 2．2．8相互作用蛋白在细胞内共定位………………………………………………………．31 2．2．9检测基因的表达情况…………………………………………………………………．35 3结果与分析…………………………………………………………………………………38 3．1EF．Tu重组蛋白的原核表达……………………………………………………………．38 1 3：1．1构建原核表达质粒pGEX…6p 3．1．2 3．2EF．Tu单克隆抗体的制备………………………………………………………………．42 3．2．1EF．Tu MAbs的筛选……………………………………………………………………42 3．2．2 MAbs效价及亚型测定………………………………………………………………。42 3．2．3 3．3鼠伤寒沙门氏菌EF．Tu的表面定位……………………………………………………44 3．3．1EF．Tu的IFA检测……………………………………………………………………………………………．44 3．3．2EF．Tu的流式细胞仪检测……………………………………………………………。45 3．3．3血清补体试验测定EF．Tu存在细菌表面……………………………………………．46 3．4 3．4．2差异蛋白的质谱测序…………………………………………………………………．47 3．5相互作用蛋白的验证……………………………………………………………………．49 3．5．2 3．5．3