动物尿样中β2-兴奋剂多残留测定.docVIP

前 言 本标准是在参阅了国内外文献的基础上，根据我国技术发展水平研究制定的，建立了气相色谱-质谱法测定动物尿液中特布他林、克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺等4种β2-兴奋剂残留。 本标准由浙江省农业厅提出并归口。 本标准浙江省畜产品质量安全检测中心浙江省疾病预防控制中心。 本标准主要起草人： 动物尿液中特布他林、克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺 残留量的测定 气相色谱-质谱法 范围 本标准规定了气相色谱－质谱（GC－MS）法测动物尿液中特布他林、克伦特罗、沙丁胺醇莱克多巴胺等4种β2-兴奋剂残留的方法。 本标准适用于动物尿液中特布他林、克伦特罗、沙丁胺醇莱克多巴胺等4种β2-兴奋剂残留量。方法检限特布他林1.0μg/L、克伦特罗2.0μg/L、沙丁胺醇1.0μg/L莱克多巴胺2.0μg/L。 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 方法原理 加入内标，调节pH值至2.0后，过阳离子交换固相萃取柱，干，N，O-双三甲基硅烷三氟乙酰胺（BSTFA）衍生于气相色谱－质谱仪上进行测定。内标法定量。 试剂和溶液 为去离子水，符合GB/T 6682二级水的规定甲醇 乙酸乙酯：色谱纯 氨水 盐酸 2mol/L盐酸溶液：取盐酸（4.4）18mL，加水至100mL，摇匀，即得。 30mmol/L盐酸溶液：取2mol/L盐酸溶液（4.5）3mL，加水至200mL，摇匀，即得。 无水硫酸钠：450℃干燥2h，备用 甲苯：色谱纯 衍生剂：N，O-双三甲基硅烷三氟乙酰胺（BSTFA） 4％氨水/乙酸乙酯溶液：取氨水mL加乙酸乙酯至1mL，充分混匀，即配即用。 SLS离子交换固相萃取柱：每根柱填料量为00mg，柱体积5mL。 标准品特布他林、 克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺，纯度98%。 同位素D9-克伦特罗D3-沙丁胺醇 β2-兴奋剂标准储备液：取特布他林、克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺标准品（4.1）mg，置mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，其浓度为mg/mL，置-20℃冰箱中，期为6个月。SLS阳离子交换固相萃取柱β2-兴奋剂混合标准工作液：吸取适量的β2-兴奋剂标准储备液（4.1），用甲醇稀释成特布他林、克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺μg/mL的混合标准工作液，置℃～8℃冰箱中，期为个月。 β2-兴奋剂内标工作液：吸取适量的β2-兴奋剂（4.1），用甲醇稀释成D9-克伦特罗D3-沙丁胺醇1.0μg/mL混合内标工作液，置℃～8℃冰箱中，期为个月。 仪器设备气相色谱-质谱仪配有电子轰击（EI）源。 离心机r/min或以上。 固相萃取装置 涡旋混合器 分析天平0.00001g。 烘箱 离心管10mL。 氮吹仪 pH计具塞试管5mL，10mL。 移液器：量程20μL～200μL，100μL～1000μL。 测定步骤 ℃～8℃冰箱中试样净化 量取试样5mL至10mL离心管中，加β2-兴奋剂内标工作液（4.1）μL，用2mol/L盐酸溶液（4.5）调节pH值至2.0，5000r/min离心5min，备用。依次用甲醇5mL、水5mL、30mmo/L盐酸溶液（4.6）5mL润洗离子交换固相萃取柱（4.1）取样液柱，用水5mL甲醇5mL洗柱子，用％氨水/乙酸乙酯溶液（4.1）mL洗，收集洗脱液无水硫酸钠（4.7）氮吹干加乙酸乙酯5mL，置于超声波清洗器中超声min，5000r/min离心5min，上清液至5mL具塞玻璃试管中，氮吹干干。 衍生 吹干加入甲苯（4.）1μL和（4.）μL，加后于涡旋混合器混匀，℃±5℃的烘箱中，加甲苯0.mL溶解GC-MS分析。另取β2-兴奋剂混合标准工作液（4.1）适量，加β2-兴奋剂内标工作液（4.1）50μL，加乙酸乙酯5mL后，氮气吹干，同步进行衍生化。 测定 色谱柱：5%苯基甲基聚硅氧烷弹性石英毛细管柱(30 m×0.25 mm×0.25μm)，或； 进样口温度：280℃； 柱温程序：初温120，保持3 min，然后以10／min升至20℃，保持min，再以0℃／min升至0℃保持min； 载气：高纯氦气（99.999%）； 流速：1.0mL/min，不分流进样进样量：2.0μLEI源：源温230℃； 电子能量：70eV； 接口温度：280℃； 电子倍增器电压： 质量扫描范围：30～550U；溶剂延迟：10min 选择离子监测方式（SIM）监测离子（m/z）：特布他林