细胞工程：细胞融合.pptVIP

融合材料 植物或微生物原生质体的制备 动物单细胞的获得 细胞融合技术 生物法— 仙台病毒法 化学法—PEG结合高Ca、 pH诱导法 物理法— 电融合诱导法 * 第二部分 细胞融合 细胞融合的定义 又称体细胞杂交（ＳＯＭＡＴＩＣ　ＨＹＢＲＩＤＩＺＡＴＩＯＮ），是指将不同来源的原生质体（除去细胞壁的细胞）相融合并使之分化再生、形成新物种或新品种的技术 细胞融合的意义 　　　１.改变遗传性状、克服远缘杂交中的不亲和障碍、更加广泛地组合起各种植物的优良遗传性状，从而培育出理想的新品种。 　　　２.创造细胞质杂种 细胞融合的定义 又称体细胞杂交（ＳＯＭＡＴＩＣ　ＨＹＢＲＩＤＩＺＡＴＩＯＮ），是指将不同来源的原生质体（除去细胞壁的细胞）相融合并使之分化再生、形成新物种或新品种的技术 细胞融合的意义 　　　１.改变遗传性状、克服远缘杂交中的不亲和障碍、更加广泛地组合起各种植物的优良遗传性状，从而培育出理想的新品种。 　　　２.创造细胞质杂种 介 绍 基本原理 植物细胞:先将两种不同植物的体细胞经过纤维素酶、果胶酶消化，除去其细胞壁，得到原生质体；而后通过物理或化学方法诱导其细胞融合形成杂种细胞；继而再以适当的技术进行杂种细胞的分检和培养，促使杂种细胞分裂形成细胞团、愈伤组织、直至形成杂种植株，从而实现基因在远缘物种间的转移。由于这个新细胞得到了来自两个细胞的染色体组和细胞质，在适宜的条件下来培养，长成的生物个体就是一个新的物种或品系。 动物细胞:由于没有细胞壁，可直接通过物理或化学方法进行两个细胞之间的融合，形成杂种细胞。 动物细胞融合的例子 单克隆抗体 1975年英国科学家Milstein和Kohler将产生抗体 的淋巴细胞同肿瘤细胞融合，成功建立了单克隆抗 体技术，而获得1984年诺贝尔医学和生理学奖。 每个B淋巴细胞仅专一地产生、分泌一种针对某 种抗原决定簇的特异性抗体，而肿瘤细胞可以无限 增殖，因此杂交瘤细胞可在体外培养或移植到体内 条件下分泌大量单克隆抗体。 单克隆抗体技术的最主要优点是可以用不纯的抗 原分子大量制备纯一的单克隆抗体。 多抗血清生产 D Antibody d C Antigen B A D B C A a b c d Lymphocytes Antibody a Antibody b Antibody c 单克隆抗体 多抗血清的缺点 Antiserum is composed of a mixture of high and low affinity antibody populations Antiserum is composed of a mixture of antibodies with different specifications. Antiserum supply limited to life of immunised animal. Quantity of antiserum is limited. Immunogen must be pure. 单克隆抗体的定义 单抗是由一种抗体分子组成. 只识别一种抗原. 由杂合细胞生产出来的. 单抗生产流程 Ag 2) LYMPHOCYTES (Lymphocytes secreting AB are preferentially selected for fusion) 1) MYELOMA CELLS Confer immortality on lymphocytes FUSION HYBRID CELLS 3) CLONE To separate cells 1 cell divides to give clone of identical cells 4) CELLS 1 type AB MAB1 单抗生产 Ab titre from serum Ab1 Ab2 Abn Spleen suspension 轻微压力 不锈钢丝网（200目） PBS+2%胎牛血清 将无菌脾切成4块 单抗生产 Immunisation with antigen Ab titre from serum Ab1 Ab2 Abn Spleen suspension Cell line –myeloma P3– NSI/I – Ag4 – 1 X63 – Ag8 - 653 Fusion with P.E.G. Immunisation with antigen Ab titr