聚-β-羟基丁酸酯高产菌株地选育及发酵条件优化地初步研究.pdfVIP

聚一13一羟基丁酸酯高产菌株的选育及发酵条件优化的初步研究 摘要 由于石油资源的日益枯竭及其塑料制品对环境造成了日益严重的“白 色污染”，因此，加快研究和开发可降解的环境友好型塑料，实现工艺上的 突破，实现可降解塑料的产业化和实用化，对于防治环境污染和实现可持 续发展具有重要的现实意义。聚羟基脂肪酸酯(PHA)是一种微生物在碳 氮失衡的情况下产生的一种塑料，是三大生物降解塑料(淀粉基塑料、聚 直是研究的重点和热点。 本实验从南宁等地区采集的样品中筛选PHB高 产菌株，通过尼罗蓝染色法筛选出菌株CK．5，PHB产量为3．4 gm。用紫外 诱变法、氯化锂诱变法、紫外氯化锂复合诱变法诱变菌株CK一5，得到菌株 CK—U76，菌株CK。U76的PttB产量为4．6 gm，比菌株CK一5的PHB产量提 高了35．3％。通过形态学观察和分子生物学鉴定，CK—U76被鉴定为芽孢杆 —}卜#=， 国属。 通过Box—Behnken 发酵条件进行初步研究，得到菌株CK—U76最佳的发酵条件：以甘油为碳 源，碳源浓度lO．98 g／L，酵母膏和蛋白胨作为联合氮源，氮源浓度25．25g／L， h，转速为180r／min，装液量 pH为8．05，发酵温度为20。C，发酵时间为72 g／L，比未优化之前的4．6g／L提高了246％。 f 本实验也对菌株CK—U76的提取方法进行了初步研究，从经济安全的 说，SDS法最合适的提取方法，因此选择此方法作为PHB的提取方法。本 实验采用紫外分光光度法、高效液相色谱法、气相色谱法对菌株CK．U76 的所产PI-IB进行定性定量分析，紫外分光光度法是比较灵敏的一种方法， 在波长为235nm处对PHB进行定性定量分析，但是样品处理过程复杂， 分析结果易受有机杂质干扰，影响其准确性；用高效液相色谱法来对PHB 进行分析j操作方便，准确性较高，适合对PHl3进行定向定量分析；气相 色谱法的优点在于不需要对细胞进行处理，峰图较好，不过反应时间比较 长，中间过程难以控制。 本实验选育出一株PHB的菌株CK—U76，通过形态学观察和分子生物 发酵条件，PHl3产量从4．6 gm提高到15．9g／L。同时对其提取条件和分析 方法进行了初步研究，对PHB的工业化生产可以提供一定的参考价值。 关键词：聚一p一羟基丁酸酯(PHB)菌种筛选发酵条件优化提取方法 分析方法 THEPRELIMINARYSTUDYOFPOLV．13 一HYDROXYBUTYRATEPRODUCINGSTRAINAND OPTIMIZATIONOFFERMENT肖汀ION CONDITIONS ABSTRACT Duetothe ofoilresourcesandthe increasingdepletion growingproblem ofwhitelution¨causedoil acceleratethe pol by plasticproducts，Therefore，to research and of to developmentenvironment—friendlybiodegradable plastic achie