染色体改构复合物（BAF）和转录因子（NF1%2fCTF）与RNA聚合酶Ⅱ在基因转录活动中的联系.pdfVIP

摘 要 录活动的重要调控因子，许多实验证实，它们共同参与了基因转录调 控活动。BAF复合物与转录因子NFl／CTF是否一同参加了由RNA聚合 酶II介导的基因转录起始复合物的形成，目前还没有比较一致的认 识，已有的模型仍缺乏实验支持。本文以Jurkat细胞、HeLa细胞和 小鼠脾T淋巴细胞为研究材料，通过酶联免疫吸附实验(ELISA)、免 疫共沉淀、免疫荧光共定位和免疫电镜双标记等实验，观察和分析了 BAF复合物与转录因子NFl／CTF和RNA聚合酶II在基因转录活动中的 实，在自主增殖的Jurkat细胞核中，存 在BAF复合物和转录因子NFl／CTF。进一步用小鼠T淋巴细胞活化体 系的研究发现，未经Conh激活的T淋巴细胞中，BAF复合物和转录因 子NFl／CTF不表达或低水平表达。经Conh激活后，小鼠脾T淋巴细胞 中BAF复合物和转录因子NFl／CTF开始表达，随着刺激时间的增加， 表达量增加。以上实验表明，BAF复合物和转录因子NFl／CTF在细胞 中的表达是与细胞活化和基因转录活动密切相关的。 2、免疫共沉淀实验证明，在活化的小鼠脾T淋巴细胞和自主增殖 起的，在没有活化的小鼠脾T淋巴细胞中这三种蛋白质没有免疫共沉 淀现象。以HeLa细胞为材料，分别用抗BRGl抗体、抗RNA聚合酶II 抗体和抗NFl／CTF抗体进行免疫荧光共定位分析，发现BAF复合物的 核心亚基BRGl和RNA聚合酶II的大亚基存在很好的荧光共定位现象， NFl／CTF和RNA聚合酶II的大亚基之间的共定位现象不明显，BRGl和 NFl／CTF也有很好的共定位现象。为了进一步揭示BAF复合物与转录 因子NFl／CTF和RNA聚合酶II的大亚基之间在亚显微结构水平的联 系，我们用HeLa细胞进行了免疫电镜双标记实验。通过计算和分析分 别代表两种蛋白质的两种金颗粒之间的距离，进一步证实BAF复合物 与RNA聚合酶II的大亚基及转录因子NFl／CTF之间的联系紧密，而转 录因子NFl／CTF与RNA聚合酶II的大亚基之间的联系相对较弱。 3、通过免疫荧光实验我们还发现，BRGl和RNA聚合酶II小亚基 B6之间没有明显共定位现象，与RNA聚合酶II小亚基B8有部分的共 定位现象；NFl／CTF与RNA聚合酶II小亚基B6有比较明显的共定位， 与RNA聚合酶II小亚基B8有部分的共定位。这些结果表明，BRGl和 RNA聚合酶小亚基B6可能不直接联系，与小亚基B8可能部分联系。 NFl／CTF可能是通过与BRGl和RNA聚合酶II小亚基B6的联系参与了 转录起始复合物的形成。免疫电镜双标记实验结果进一步证实了上述 观察结果，即BRGl与RNA聚合酶I I小亚基联系不紧密或不直接联系。 转录因子NFl／CTF与RNA聚合酶II小亚基B6的联系比较紧密。 4、研究表明，肌动蛋白是BAF复合物的一个亚基，我们在本论文 中通过蛋白质免疫沉淀、免疫荧光共定位和免疫电镜双标记实验，探 讨了肌动蛋白与BRGl、转录因子NFl／CTF和RNA聚合酶II之间的联 系。结果表明，在活化的小鼠脾T淋巴细胞和自主增殖的Jurkat细胞 中，肌动蛋白可以与BAF复合物、转录因子NFl／CTF和RNA聚合酶II 结合。肌动蛋白与BAF复合物和RNA聚合酶II的联系紧密，与转录因 子NFl／CTF的联系不太密切。 根据上述实验结果，我们推测，在转录活跃的细胞中，BAF复合 物、转录因子NFl／CTF、RNA聚合酶II和肌动蛋白是结合在一起的， 共同参加了基因转录起始复合物的形成活动；BAF复合物与RNA聚合 酶II的大亚基直接联系，与转录因子NFl／CTF通过其N末端直接联系， 转录因子NFl／CTF与RNA聚合酶II小亚基B6直接联系。l一～b ’l ，一 一7’7 关键词： BA—F：复厶物；RNA聚合酶II；转录因子母偷；基因转录 ———————‘—：——————-_一一．————一、-——‘==—二二二。 夥，缘龟4耷 CO．relationsofChromosome The RemodelingComple