钩藤总碱抑制高血压血管外膜重构机制研究.pdfVIP

in adventitia. Key Words rhynchophylla total alkaloid; hypertension; vascular remondeling in adventitia; proliferation of VAF 目 录 引 言 1 第一部分 钩藤的药用沿革 2 一、钩藤入药的历史沿革 2 二、钩藤平肝以治眩 4 三、钩藤对高血压病治疗的现代研究 6 第二部分 钩藤总碱抑制高血压血管外膜重构的实验研究 8 实验一 血管外膜成纤维细胞的原代培养及鉴定 8 一、实验材料 8 （一）实验动物 8 （二）实验试剂 8 （三）实验试剂的配制 8 （四）实验仪器 9 二、实验方法 9 （一）原代细胞培养 9 （二）传代培养 10 （三） VAF 鉴定 11 三、实验结果 12 （一）形态学观察 12 （二）免疫细胞化学染色鉴定 12 实验二 MTT 比色法观察钩藤总碱对血管成纤维细胞增殖的影响 13 一、实验材料 13 （一）实验细胞 13 （二）实验试剂 13 （三）实验药物 13 （四）实验仪器 14 二、实验方法 14 （一） MTT 比色法筛选实验药物剂量 14 （二） MTT 法观察钩藤总碱对血管成纤维细胞增殖的影响 16 三、数据统计方法 17 四、实验结果 18 （一）实验用药药物剂量的筛选结果 18 （二） MTT 法观察钩藤总碱对血管成纤维细胞增殖的影响 19 实验三 电镜下观察钩藤总碱对血管紧张素Ⅱ诱导增殖的成纤维细胞形态的影响... 21 一、实验材料 21 （一）实验细胞 21 （二）实验试剂 21 （三）实验药物 21 （四）实验仪器 21 二、实验方法 22 三、实验结果 23 实验四 钩藤总碱对 Ang Ⅱ诱导增殖的VAF 细胞周期的影响 24 一、实验材料 24 （一）实验细胞 24 （二）实验试剂 24 （三）实验药物 24 （四）实验仪器 24 二、实验方法 25 三、数据统计方法 26 四、实验结果 26 实验五 钩藤总碱对 Ang Ⅱ诱导增殖的血管成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原 28 mRNA 表达的影响 28 一、实验材料 28 （一）实验细胞 28 （二）实验试剂 28 （三）实验药物 28 （四）实验仪器 28 （五）实验前准备事项 29 二、实验方法 30 三、数据统计方法 33 四、实验结果 33 讨 论 35 一、血管外膜在高血压血管重构中的作用 35 二、外膜成纤维细胞在高血压血管重构中的作用 36 三、利用血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）体外干预血管外膜成纤维细胞（VAF ）建立高血压 外膜重构模型的评价 38 四、钩藤总碱对血管成纤维细胞增殖的影响 41 五、电镜下观察钩藤总碱对 Ang Ⅱ诱导增殖的VAF 形态的影响 43 六、钩藤总碱对 Ang Ⅱ诱导增殖的VAF 细胞周期的影响 45 七、钩藤总碱对 Ang Ⅱ诱导增殖的VAF Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA 表达的影响 47 结 语 49 参考文献 51 综 述 55 附 录 67 致 谢 75 查新报告 76 引 言 本课题为山东省自然科学基金资助项目（编号：Y2006C99）。 钩藤，原名“钓藤”，其入药始载于《名医别录》。南北朝时期的医家认为钩藤 其气轻清，因此当时常常用来作为小儿的专用药，《名医别录》的作者陶弘景指出： “疗小儿，不入余方” 。后世中医学家随着临床用药经验的积累，认为钩藤味甘、 性微寒，入肝、心包经，具有息风止痉、清热平肝的功效，其临床应用范围不断被拓 宽，常用来治疗小儿惊风、夜啼、热盛动风、肝阳头晕、肝火头胀痛。现代药理研究 技术的发展使得钩藤在临床上应用得更加广泛。钩藤通过其药物有效成分的作用或与 它药配伍应用可以治疗多种疾病，其中对高血压病的治疗效果突出。临床中发现其降 压作用平