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第三章 基因工程制药技术 第三章 基因工程制药技术 第一节 概述 第二节 重组DNA技术的基本过程 第三节 基因工程工具酶和克隆载体 第四节 基因工程药物的生产 第一节 概述 生物技术的核心就是基因工程，基因工程技术最成功的应用就是用于生物治疗的新型生物药物的研制。 传统生物药物由于来源及制备上的困难、价格等因素的影响，此外在制备过程可能受到的病毒、衣原体、支原体等的感染等问题，促使人们寻求安全、实用、疗效可靠的新方法来制备生物药物。 基因工程正在逐渐显示其在生物技术药物制备上的优势。 应用基因工程技术可十分方便且有效地解决上述提到的问题，从量、质上都可以得到改进，且可以创造全新物质。 如今，癌症、病毒性疾病、心血管疾病以及内分泌等方面的预防、治疗和诊断已可通过基因工程技术获得。 一、基因工程的基本定义 基因工程（Genetic Engineering） 原称遗传工程，是将一种或多种生物体（供体）的基因与载体在体外进行拼接重组，然后转入另一种生物体（受体）内，使之按照人们的意愿遗传并表达出新的性状。 基因工程的三要素：供体、受体、载体。 （一）基因工程药物的种类 激素和多肽类 酶类 疫苗 单克隆抗体 (二)基因工程的意义 1、大规模生产生物分子 2、设计构建新物种 3、寻找、分离和鉴定生物体尤其是人体的遗传信息资源 体外将腺苷脱氨酶基因插入反转录病毒 ↓ 让该病毒感染体外培养的患儿免疫系统的白细胞 ↓ 患儿白细胞因反转录而获得腺苷脱氨酶基因 ↓ 将此白细胞重新注射到患儿体内 ↓ 患儿获得合成腺苷脱氨酶能力 三、利用基因工程技术生产药品的优点 （1）可以大量生产过去难以获得的生理活性蛋白和多肽（如胰岛素、干扰素、细胞因子等），为临床使用提供有效的保障； （2）可以提供足够数量的生理活性物质，以便对其生理、生化和结构进行深入的研究，从而扩大这些物质的应用范围； （3）利用基因工程技术可以发现、挖掘更多的内源性生理活性物质； 利用基因工程技术生产药品的优点： （4）内源性生理活性物质在作为药物使用时存在的不足之处，可通过基因工程和蛋白质工程进行改造和去除。如白细胞介素-2的第125位半胱氨酸是游离的，如将此半胱氨酸改为丝氨酸或丙氨酸，白细胞介素-2的活性以及热稳定性均有提高； （5）利用基因工程技术可获得新型化合物，扩大药物筛选来源。 基因工程药物制备的一般过程 基因工程药物生产的上游和下游 上游：主要指的是目的基因分离、工程菌（或细胞）构建。上游阶段的工作主要在实验室内完成； 下游：主要指的是从工程菌（或细胞）的大规模培养一直到产品的分离纯化、质量控制等。 复习：一般概念 基因作为唯一能够自主复制、永久存在的单位，其生理学功能以蛋白质形式得到表达。 DNA序列是遗传信息的贮存者，它通过自主复制得到永存，并通过转录生成mRNA，翻译生成蛋白质的过程控制所有生命现象。 碱基：腺嘌呤（A）、鸟嘌呤（G）、胸腺嘧啶 （T） 、胞嘧啶（C） 、 尿嘧啶（U） 碱基配对 A:T， G:C ， A:U 遗传密码——三联子 mRNA上每3个核苷酸翻译成蛋白质多肽链上的一个氨基酸，这3个核苷酸就称为一个密码，也叫三联子密码。 翻译时从起始密码子AUG开始，沿mRNA5’→3’的方向连续阅读直到终止密码子，生成一条具有特定序列的多肽链。 遗传信息传递的 中心法则 DNA的半保留复制实验依据 ??? 基因表达包括转录和翻译两个阶段。 转录是指拷贝出一条与DNA链序列完全相同（除了T→U之外）的RNA单链的过程，是基因表达的核心步骤。 翻译是指以新生的mRNA为模板，把核苷酸三联子遗传密码翻译成氨基酸序列、合成蛋白质多肽链的过程，是基因表达的最终目的。 遗传信息流动示意图 补充：基因工程的发展史 （一）、理论上的三大发现 1、1944年，Oswald Avery证实DNA是遗传物质。 2、1953年，Waston 和 Crick提出DNA双螺旋结构和半保留复制 学说。 3、1961年至1966年遗传密码的破译。 （二）技术上的三大发明 1、20世纪70年代，限制性核酸内切酶和DNA连接酶的发现。有 了可以对DNA进行切割和连接的工具酶。 2、1973年，Cohen首次将质粒作为基因工程的载体使用。 3、1970年，逆转录酶发现，使真核基因的制备成为可能。 1973年，美国斯坦福大学的Cohen和Beyer 建立了DNA重组技 术，创立了基因工程的基本模型，被誉为基因工程