2，4-D人工抗原合成及2，4-D类农药特异性多克隆抗体的研制.pdfVIP

维普资讯 农业环境科学学报 2008，27(5)：2052—2057 JournalofAgro—EnvironmentScience 2，4一D人工抗原合成及 2，4一D类农药特异性多克隆 抗体的研制 王升吉，尚佑芬，赵玖华，杨崇良，路兴波，孙红炜 (山东省农业科学院植物保护研究所 ，山东济南250100) 摘 要：通过改良EDC法，将2，4一DB、2，4一D分别与载体蛋白(BSA、OVA)偶联合成了2，4一D的免疫原2，4一DB—BSA、2，4一D—BSA 和包被原2，4一DB—OVA、2，4一D—OVA。免疫抗原测定结果表明，所得紫外吸收光谱 ，具有载体蛋白BSA和半抗原 2，4一DB或2，4一D 的特性，最大吸收峰为282am。合成2，4一DB—BSA、2，4一D—BSA免疫抗原的结合比分别为 1：24、1：20，合成的2，4一DB—OVA、2，4一D— OVA包被原的结合比分别为 1：10、1：8。上述两种免疫原分别免疫新西兰白雄兔，获得2，4一D类农药多克隆抗体。其中免疫 2，4一 DB—BSA的两只兔PBD1和PBD2的效价较高，分别是 1：102400和 1：51200。选择效价较高的PBD1多克隆抗体进一步优化筛选出 抗原抗体的工作浓度 ，2，4一D—OVA包被原3p,g·mL一，PBD1多克隆抗体 1：12800。经测定，该多克隆抗体对 目标检测物2,4一D、 2，4一Dbutylester敏感度较高，抑制中浓度(I50)、检测限(I∞)分别为，2，4一D：179．8ngm·L～，1．09ng·mL-；2，4一Dbutylester：3010．0ng· mL-，1．53ngm·L-。对2，4一D识别的特异性也较强。另外测定了制备 2，4一D多克隆抗体对几种2，4一D类似结构化合物交叉特异性反 应，2，4一DB最强，2，4一D次之，之后依次为2，4一D丁酯、2，4一D异丙酯，交叉反应性较差的有2甲4氯、2，4，5-涕、2，4一滴丙酸。 关键词：2，4一D；半抗原；免疫抗原；酶联免疫吸附测定(ELISA)；抗体 中图分类号：X592 文献标识码 ：A 文章编号：1672—2043(2008)05—2052—06 SynthesisoftheAntigensfor2．4一DTypeandDevelopmentofItsSpecificPolyclonalAntibody WANGSheng-ji，SHANGYou-fen，ZHAOJiu-hua，YANGChong-liang，LUXing-bo，SUNHong-wei (InstituteofPlantProtection，ShandongAcademyofAgriculturalSciences，Jinan250100，China) Abstract：2，4-DB，2，4-D，astwohaptens，wereconjugatedtobovineserumalbumin (BSA)andovalbumin (OVA)withimprovedEDC method，twoimmunogensof2,4一DB—BSA，2,4一D—BSA andtwocoatingantigensof2,4-DB-OVA，2,4-D-OVAwereobtained．Theeharae- teristiesinultravioletabsorptionspectrum ofimmunogenpossessedthoseofboht carrierproteinandhaptens，thelocationoftheabsoprtion peakwasat282am，sameasthatofhappten，2，4-D．Thereactionratiosof2，4-DB-BSAand2，4-D-BSA were1：24and1：20respectively． Thoseof2,4-D-OVA and2,4-DB-OVA．were1：10and1：8．Th especificpolyclonalantibodyfor2,4-DwereobtainedbyimmunizingNew Zealna dmalewhiterabbitswiththetwoantigens．TworabbitsPBD1andPBD2wereimmunizedwith2,4一DB—BSA，producedhightitersof polyelonalantibody(anti