c-Ski癌基因对肿瘤相关成纤维细胞活化的影响.pdfVIP

． -．— — 266—--—— 重庆医科大学学报2015年第4O卷第 2期 (JournalofChongqingMedicalUniversity2015．Vo1．40No．2) DOI：10．13406~．cnki．cyxb．000020 c-Ski癌基因对肿瘤相关成纤维细胞活化的影响 杨得志 ，王黎阳z，柳满然 z (1．广西柳州市中医院病理科，柳州 545001；2．重庆医科大学临床检验诊断学教育部重点实验室，重庆 400016) 摘【 要】目的：研究癌基因c—Ski对乳腺癌相关成纤维细胞 cancer—associatedfibroblasts，CAFs)活化的影响。方法：应用基因重 组技术，将c—ski基因克隆到载体pBABE—puro，转染至永生化的正常乳腺成纤维细胞 normalfibroblasts，NFs)，嘌呤霉素药物 筛选稳定转染细胞株 ；Westernblot检测转染后c—Ski、d一平滑肌肌动蛋白(0一【smoothmuscleactin，0一【SMA)和成纤维细胞活化蛋 白(fibroblastactivationprotein，FAP)的表达；通过MTF法、流式细胞术、细胞划痕实验及 Transwell细胞侵袭实验研究转染前、后 成纤维细胞增殖、迁移、侵袭能力的差异；收集细胞上清制备条件培养基 ，用Transwell细胞侵袭实验分析转染后成纤维细胞对 MD—MB一231细胞侵袭能力的影响。结果：成功构建重组质粒pBABE—puro—ski．Westernblot检测结果显示，pBABE—puro—ski转 染组细胞中c—Ski、0一【SMA和FAP表达明显高于空白对照组细胞(尸=0．000，P=O．001，P=-0．002)；MTT法结果显示转染组细胞增 殖能力高于空白对照组细胞 (尸=0．O11)；转染组细胞的s期含量 (38．58-i-1．28)明显高于空载体组(25．05±0．52)和空白对照组 (26．01±0．86)，差异具有统计学意义(尸=0．000)；细胞划痕实验及Transwell细胞侵袭实验结果表明转染组细胞的迁移、侵袭能 力均高于空载体组和空白对照组细胞；转染组细胞条件培养基能明显促进MD—MB一231细胞的侵袭能力。结论：c—Ski癌基因表 达上调能促进NFs活化为CAFs．并进一步促进乳腺癌细胞MD～MB一231的侵袭能力。 【关键词】乳腺癌；e—Ski癌基因；成纤维细胞 【中图分类号】R737．9 文【献标志码】A 收【稿 日期】2013—10-08 Effectsofc-SkioncogeneontheactivationOfCanCer—aSSOCiatedfibroblasts YangDezhi，WangLiyang2，LiuMnarna 。 (．DepartmentofPathology，HospitalofTraditionalChineseMedicineinLiuzhou； 2．KeyLaboratoryofLbaoratoryDiagnostics，MinistryofEducation，ChongqingMedicalUniversity) A【bstract]Objective：Toresearchtheeffectofc—Skioncogeneontheactivationofbreastcancer—associatedfibroblasts(CAFs)． Methods：Thec—Skigenewascloned intothevectorpBABE-purotoconsturcttheexpression vectorpBABE—puro—Skithenwas transfectedintonomralfibroblasts(NFs)；thestabletransfectedfibroblastswereselectedbypuromycin．Westernblotwasusedtoana— lyzetheexpressionofc-Ski，(x-smoothmuscleaetin(x(-SMA)andfibroblastac