上调小鼠骨髓来源树突状细胞FcγRⅡb表达可抑制其抗原提呈功能.pdf

664 细胞与分子免疫学杂志(ChinJCellMolImmuno1)2015，31(5 · 论著 · 文章编号：1007—8738(2015)05—0664—04 上调小鼠骨髓来源树突状细胞FcvRⅡb表达可抑制其抗原提呈功能 孙 卉 ，马海峰 ，曹秀琴 ，杨志伟件 (宁夏医科大学基础医学院病原生物学与免疫学系，宁夏银川750004；解放军 40l医院医务处，山东 青岛266071；宁夏医科大学基础医学院生育力保持省部级共建教育部重点实验室，宁夏银川750004) [摘 要] 目的 构建FcRIIb慢病毒载体 ，感染小 鼠骨髓来源树突状细胞 (BMDC)，观察 BMDC抗原提呈功能变化。方法 小鼠骨髓细胞中提取 RNA，反转录后进行PCR扩增得到FeaRIIb目的基因，将FeaRIIb基因插入慢病毒表达载体TRE中构建 FeaRIIb重组慢病毒载体。HEK293T细胞包装慢病毒，体外进行小鼠BMDC的诱导培养及鉴定。将慢病毒感染 BMDC后 ，实 时定量PCR检测BMDC中FeaRlIbmRNA水平，Westernblot法检测BMDC中FeaRIIb蛋白水平，流式细胞术分析BMDC表面 分子 CD80、CD86、CD40、MHCII的变化。结果 成功构建FeaRIIb重组慢病毒载体，经酶切、PCR鉴定及测序鉴定成功。体 外诱导培养 BMDC，可见细胞表面大量树枝样突起形成。包装慢病毒感染BMDC后 ，FcTRIIbmRNA和蛋白水平均较未感染 BMDC增高。流式细胞术分析感染后 BMDC表面分子 CD80、CD86、CD40、MHCII的表达量均较未感染 BMDC下降。结论 DC上 FeaRI1b的过表达能够下调其抗原提呈功能。 [关键词]FeaRIIb；慢病毒；树突状细胞 [中图分类号]R392．1，R456，Q782 [文献标志码]A Fc^y受体 (FcTreceptor，Fc~／R)是一类特异性的 CIMO-APC、CD86．APC均购 自eBioacience公司。PerCP-CyTM5．5 IgGFc受体，功能上可以分为活化性受体和抑制性 标记的大 鼠抗小鼠CD32抗体购 自BDPharmingen公司。 受体两类。FeyRIIb(CD32b)作为 目前唯一发现的 Westernblot实验使用的兔抗小鼠CD32抗体购 自SantaCruz公 抑制性 Fc~／R，对免疫平衡起重要调节作用…。 司、HRP标记的山羊抗兔 IgG购 自ThermoFisher公司。重组 Fc~／RlIb低表达或基因敲除鼠易患 SLE等 自身免疫 小鼠粒细胞 巨噬细胞集落刺激 因子 (recombinantmurine 性疾病 j。Fc~／RIIb表达量的变化可以影响自体反 grnaulocytemacrophagecolony—stimulatingfactor，rmGM·CSF)、重 组小 鼠 白细胞介 素 4(recombinnatmurineinterleukin4， 应细胞的增殖 J。Fc~／RIIb过表达可以减轻过敏性 rmIL一4)、重组小鼠肿瘤坏死因子 (recombinantmurinetumor 哮喘小 鼠的气道过敏性炎症反应 4]。树突状细胞 necrosisfactor ，rmTNF-)购自PEPROTECH公司。小鼠CDllc (dendriticcells，DC)做为功能最强大的抗原提呈细 微珠(microbeads)购 自Miltenyi公司实时定量 PCR(real—time 胞，在 自身免疫性疾病等治疗中已显示出良好的临 quantitativePCR，qRT-PCR)试剂盒购 自ThermoScientific公 床应用前景。但过表达 FeaRIIb对 DC功能的影响 司。2～3月龄雌性无特定病原体 (specificpathogenfree，SPF) 及其相关机制研究尚未查见相关文献报道。本研