水稻生物技术在育种中的应用.ppt

第二章 生物技术在水稻育种中的应用 主要内容 第一节 组织培养技术在水稻育种中的应用 第二节 无融合生殖的应用 第三节 分子标记辅助育种 第四节 转基因技术的应用 第五节 存在问题及对策 第一节 组织培养技术在水稻育种中的应用 一、花药和花粉培养的应用 二、体细胞培养及细胞突变体的筛选 三、原生质体融合与体细胞杂交 一、花药和花粉培养的应用 1、研究进展 2、与常规育种相比，具有优点 3、花药培养程序 一、花药和花粉培养的应用 1、研究进展 1964年 Gula 首次报道毛叶曼陀罗花培成功。 1968 年新关和大野获得了粳稻花培小植株。 我国水稻花培育种始于 1970 年 ,1975 年首次应用此法育成水稻新品种“单丰1 号”、“花育1 号”、中花8号等。 一、花药和花粉培养的应用 2、与常规育种相比，具有优点： （1）缩短杂交育种年限 常规育种 一般要 8～10 年 （2）提高了选择效率 来自于小孢子的双单倍体花粉植株的表现型和基因型一致 ,没有显性基因对隐性基因的掩盖现象。 一、花药和花粉培养的应用 3、花药培养程序 （1）取材 品种（基因型) 粳籼粳稻籼稻 （2）预处理 低温冷藏 10oC下2-3周 （3）消毒 漂白粉饱和液上清液 0.1%升汞 （4）接种 （5）培养 N6或MS培养基，2，4-D诱导 （6）单倍体植株的移栽 二、体细胞培养及细胞突变体的筛选 1、概念 在细胞水平上直接进行诱变与筛选突变体的研究。 二、体细胞培养及细胞突变体的筛选 2、诱变剂种类和材料： （1）诱变剂种类 化学诱变剂 甲基磺酸乙酯（EMS)、亚硝基胍（MNNG) 物理诱变 射线处理 （2）材料 游离的植物细胞、原生质体或小孢子的群体 二、体细胞培养及细胞突变体的筛选 3、应用：目前用这种方法已筛选到抗病、抗盐、高赖氨酸、高蛋白、矮秆高产的突变体 ,有些已用于生产。 例如 陈受宜 EMS诱变和盐胁迫反复筛选得到稳定的9代粳稻突变体，采用130个标记作探针对突变体作RFLP分析，发现了第7染色体两个突变位点（RG711和RG4）。 三、原生质体融合与体细胞杂交 1、概念 原生质体融合又称为细胞杂交 ，指植物原生质体，在人为的条件下互相融合，获得细胞杂种植株。 分为三类：体细胞杂交 ；配子间细胞杂交 ；配子-体细胞杂交 。 体细胞杂交概念 体细胞杂交是用双亲的体细胞原生质体或其衍生系统进行诱导融合，再经培养、筛选、鉴定、等步骤得到细胞杂种 。 三、原生质体融合与体细胞杂交 2、优点 （1）克服了远缘杂交不亲和性 （2）扩大植物的变异范围，拓宽种质来源，选育出新种质， 三、原生质体融合与体细胞杂交 3、水稻上的应用 栽培稻品种之间、栽培稻与野生稻之间的原生质体融合已有报道。 融合方式 对等的融合和不对称融合 化学诱导融合和电激融合 PEG(聚乙二醇)融合中以丙酸钙取代氯化钙 第二节 无融合生殖的应用 1、研究进展 20 世纪70 年代 利用无融合生殖固定水稻杂种优势 1987 年 ,袁隆平 ，三系法到两系法 ,最后实现一系法 2、发展方向 多倍体水平，即在多倍体水稻中通过种质寻找法、种质诱变法、杂交转育法、生物技术筛选等创造具有实用价值的水稻无融合生殖种质。 第三节 分子标记辅助育种 一、遗传图谱的构建 二、亲缘关系分析 三、农艺性状的定位 四、其他 一、遗传图谱的构建 水稻第一张分子图谱由美国 Cornell 大学 Tanksley 实验室发表 ,目前该图谱已有标记 700多个 ,其中绝大部分是 RFLP标记 ,有11 个微卫星DNA标记、26 个克隆基因和43 个表型性状。 日本也发表了水稻分子图谱。高密度分子图谱的建成为基因定位、物理图谱的构建和依据图谱的基因克隆奠定了基础。 我国已在世界上首次成功地构建了高分辨率水稻基因物理图谱 ,这必将对水稻生物技术的发展产生深远影响 。 水稻被定位标记数目已多达 1100 多个 ,而且平均分布于每条染色体上近100 个 ,这样高密度的图谱为水稻的标记辅助选择提供了极为有利的条件(Kurata et al ,1994) 。 二、亲缘关系分析 1、优点：在分子图谱的帮助下，提高了对品种之间的比较结果的可靠性。 2、应用：品种资源的鉴定与保存、探究作物的起源与进化、杂交亲本的选择等等。 例如;Wang 和 Tanksley 应用10 个 RFLP标记 ,对70 个水稻品种进行了亲缘关系分析。品种间多态性的检测是选择合适亲本、构建分离群体、进行基因定位的基础。 三、农艺性状的定位 在水稻中 ,已经定位了多种重要农艺性状 ,包括抗稻瘟