油菜花粉粒萌发的荧光观察本科毕业论文.ppt

油菜花粉粒萌发的荧光观察 学生：施晓丽 指导教师：龚莉 1 . 引言 2. 材料与方法 2. 材料与方法 2.2.2花粉粒萌发的观察方法 采用荧光显微镜法观察花粉粒的萌发。具体流程如下：取去保存的雌蕊，用蒸馏水冲洗干净，置于载玻片上，在载玻片上将油菜花柱用刀片纵切成薄片,用吖啶橙染液染色10分钟，然后盖上盖玻片，均匀用力压片，在荧光显微镜下观察并拍照。 3.结果与讨论 3.1 花粉和柱头的形态特征 甘蓝型油菜花粉粒赤道面观近圆形或长圆形，极面为三裂圆形，花粉具三个萌发沟，沟上覆盖有颗粒状物。甘蓝型油菜柱头主要由众多的乳突组成，乳突呈长圆柱形，顶端钝圆。 图1 油菜花粉粒萌发的荧光观察异花授粉 2小时 20 *10 花粉粒和乳突细胞 图2 油菜花粉粒萌发的荧光观察异花授粉 2小时 40*10 萌发中的花粉粒 图5 油菜花粉粒萌发的荧光观察异花授粉 乳突细胞 2小时 40*10 图7 油菜花粉粒萌发的荧光观察自花授粉 4小时 20*10 3.结果与讨论 3.2 自花授粉的花粉在柱头上的萌发 授粉4小时种内杂交的组合，其花粉已大量萌发，在8小时以后花粉管开始伸长，24小时后全部萌发。 3.3 异花授粉的花粉在柱头上的萌发 在种间杂交组合中，授粉2小时以后，柱头上的花粉已有部分开始萌发，花粉粒的三个萌发孔清晰可见，8小时以后花粉管开始伸长，24小时后全部萌发。 3.结果与讨论 由此可见油菜自花授粉、异花授粉亲和度高。但是无论在种内杂交还是种间杂交中，均发现相同的情况：少数花粉粒不能萌发。通过观察发现此时的花粉柱头没有开裂，花粉管也没有伸长，油菜柱头上萌发的花粉粒不能进入柱头。 3.结果与讨论 3.4 花粉管与乳突细胞的相互作用 综合我们的电镜观察，我们认为花粉管应该是通过溶解乳突细胞壁(纤维素——果胶层)而进入到柱头，有生活力的花粉粒长出的花粉管在花柱中伸长,发出黄绿色荧光,清晰可见,且各花粉管在花柱中生长的长度参差不齐，而没有生活力未萌发的花粉粒及花柱的其他组织没有荧光。 4.小结与讨论 本研究利用荧光显微镜技术，同步观察了油菜自花、异花花粉授粉后在柱头上的萌发生长情况，为能更好地证明油菜花粉自交的高度亲和性，本试验还有待改进。例如，在人工去雄套袋后不要立即进行试验，等雌蕊柱头全部开裂后再进行人工授精，或者将试验分成两组，一组雌蕊柱头全部开裂后授精，另一组雌蕊柱头没有开裂时授精，由此对比最终的试验结果。 4.小结与讨论 其次，在本次试验过程中由于投手切片技术不够熟练，切片太厚，无法压片均匀，致使没有观察和拍摄到花粉管在柱头中萌发的确切照片，成为本次试验的重大遗憾。 采用荧光显微镜技术，在WU激发下花粉发出黄绿色荧光，能够清晰的看见花粉粒的三个萌发孔，花粉管在花柱内穿行时产生大量的胼胝质，产生强烈的荧光，因此，采用荧光显微镜法能快速测定植物授粉的亲和性，可以弥补以往传统试验的不足。 * * 油菜是十字花科植物,开花传粉后,落在柱头上的花粉粒经识别,亲和的则吸收柱头上的水分和分泌物开始萌发,内壁从萌发孔突出,继续伸长,形成花粉管。为观察花粉粒的萌发,现在植物学实验多数是采集花粉粒,在含有蔗糖、硼酸、琼脂的培养基上培养几十分钟,使其萌发,然后制片置于显微镜下观察。此方法不能显示其在花柱上的实际萌发情况。花粉粒在柱头上萌发及在花柱中伸长的真实情况,一般采用石蜡切片观察,这种方法费时、费工,效果不好。而利用荧光染料及荧光显微镜可弥补上面两种方法的不足,操作简单,效果显著。 2.1材料: 安庆师范学院生命科系植物园中种植的垦C1和7H321号油菜植株及其花粉 。 2.2方法 2.2.1人工授粉取样 2009年3月19日上午8：00—9：00，选取还未散粉的花蕾先进行去雄套袋，将取下的花粉置于培养皿中保存。于当日上午9：00—10:00对雌蕊柱头进行人工授粉。授粉后2，4，6，8，24小时分别采摘4朵花，取雌蕊放入卡诺氏固定液中固定4小时以上（固定液冰乙酸：无水乙醇=1：3），然后置于70%乙醇中保存，待用。 图2 油菜花粉粒萌发的荧光观察异花授粉 2小时 40*10 萌发中的花粉粒 图4 油菜花粉粒萌发的荧光观察自花授粉 4小时 20*10 图6 油菜花粉粒萌发的荧光观察自花授粉 4小时 20*10