PAF受体拮抗剂的筛选及抑制粘附作用的分析.pdf

OFMD DISSERTATION !坐!!兰垒!型!竺!!!坚型!型!!!!!!!!璺!!!!竖!!!!!坚型!!!!!!!堕壁 一． 摘要 本文以本室已建立的测定D．葡萄糖醛酸酶释放的筛选方法，从20种定向合 ‘——，√_———————_一 成的化合物中筛选出两个PAF受体拮抗作用较强的化合物0916和0920，并测 定其量效关系。fr在本实验室原有工作的基础上，建立了牛主动脉内皮细胞与大 鼠多形核白细越掏粘附MTT法检测模型，方法学考查显示：凝血酶(02—2u／m1) 内皮细胞6、12、24小时可引起粘附。与其他粘附测定方法相比，本法实验材 料易得，能反映细胞粘附特点且具有简便、经济、稳定的特性。用此粘附模型 胞与白细胞粘附的影响。结果显示：化合物对凝血酶(1u／m1)刺激30分钟及 肿瘤坏死因子(500u／m1)刺激12小时引起的粘附均显示出显著的抑制作用。 表明化合物对凝血酶引发的短时程粘附效应和肿瘤坏死因子引发的长时程粘附 效应都有一定程度的抑制作用。在此基础上，，f，本文进一步探讨了化合物抑制细 胞粘附的有关机制，观察了化合物对多形核白细胞和内皮细胞一些与粘附相关 共刺激的中性粒细胞超氧阴离子的产生具有不同程度的抑制作用，对rhTNF．a 诱导的内皮细胞IL-8分泌具有～定抑制作用，对于LPS刺激的内皮细胞NO生 成有显著的促进作用。表明化合物对粘附的抑制作用可能是通过对超氧阴离子 和IL．8释放的抑制、对NO合成的促进作用等多方面的影响而产生的。还观察 了化合物对rhTNF．a刺激的内皮细胞表面粘附分子ICAM．1在蛋白水平和 mRNA水平表达的影响。结果显示：化合物对rhTNF．a刺激的内皮细胞表面 ICAM．1蛋白表达和mRNA的表达均具有抑制作用。表明化合物通过抑制内皮 细胞上主要的粘附分子ICAM一1蛋白和mRNA水平的表达发挥其对粒细胞与内 皮细胞间粘附的抑制作用。对化合物0916、0920的体外毒性实验显示两化合物 在10一m01．L。浓度下对体外培养的多种实验动物细胞没有毒性作用4本文还观 察了化合物0916、0920对整体动物炎症模型的作用。0结果表明：对小鼠巴豆油 MD DISSERrMIONOF Medical Chinese ofMedical Union Academy sciences＆Pekingcollege 耳炎，PAP诱发的小鼠皮肤血管通透性增高，两种化合物均显示出显著抑制作 用，对小鼠角叉菜胶足肿胀，化合物0916显示显著的抑制作用。总之，Mly 类化合物3—3及在此基础上进一步合成的化合物0916，0920，322为一类新型 的PAP受体拮抗剂，可显著抑制粘附反应及相关的多种生物学效应，且具有明 显的体内抗炎作用。本研究为这一新类型PAF受体拮抗剂提供了新的侯选化合 物’同时为其药效学及作用机制研究提供了新的方法和数据心 MD OF DISSERIlATION Chinese ofMedical UnionMedical Academy sciences＆Pekingcollege Abstract a mediator factor(PAF)is with Platelet·activating potentphosp