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pH．Stat法高密度培养基因工程大肠杆菌表达超高温菌基因 摘要 本文比较了三种葡萄糖测定方法在基因工程大肠杆菌高密度培养中的应 用，发现在微生物培养实验中常用的3，5．二硝基水杨酸测定葡萄糖方法在本 实验中与其它方法有严重偏差，可导致错误结论。采用葡萄糖氧化酶一过氧 化氢酶法监测大肠杆菌高密度培养过程中葡萄糖浓度的变化，根据监测结果 ， 制定在40L发酵罐中分批补料培养策略。(通过比较pH值分别在回升o．08、 ＼ fji j pH．Stat补料培养方法获得基因工程菌的高密度培养，且接近国外用同样方法 h后在中等细胞密 获得的高密度培养水平(60．59·L～DCW)。经补料培养6 度(OD600值为65．1)时用IPTG诱导培养，诱导4 h后胞内Ⅸ一淀粉酶活力 I 达最高值972U·ml～，酶蛋白占胞内可溶性蛋白的5．4％。广矿1 ／ 本文在国内首次利用含稀有密码子对应的tRNA基因的大肠杆菌宿主 I BL21一Codon j。 普通BL21(DE3)plysS的2倍。 本文比较了乳糖诱导与IPTG诱导trc启动子表达超高温菌基因的表达率， j { 结果乳糖诱导的酶活力是IPTG诱导的56％。 关键词：P 高密度培养，大肠杆菌，超高温菌，稀有密码子，乳糖 OF GENE EXPRESSION OF CULTURE HIGH．DENSITY IN E．coliBY RECOMBINANT pH-STAT ABSTRACT of determination of Threemethods high glucose during were acidmethodwas E．coli recombinant 3．5-Dinitrosalicylic compared．The to interfered inthis offed-batch be strategy proved seriouslyexperiment．The basedontheresultofGOD—POD culturein40Lf