海洋微生物对对Hela肿瘤细胞的抑制效果研究硕士论文.doc

目录 1引言 6 1.1 海洋微生物的特殊环境及海洋真菌的生态类型 7 1.1.1 木生真菌 7 1.1.2 寄生藻体真菌 8 1.1.3 红树林真菌 8 1.1.4 海草真菌 8 1.1.5 寄生动物体真菌 8 1.2 海洋真菌的产生的生物活性物质 9 1.2.1来源于海洋真菌的抗肿瘤活性物质 9 1.2.2来源于海洋真菌的抗菌活性物质 9 1.2.3来源于海洋真菌的其他活性物质 10 1.3本论文的研究思路、方法及技术路线 10 1.3.1本论文的研究思路 10 1.3.2本论文涉及的研究方法 11 1.3.3本论文所采用的技术路线 11 2 材料与步骤 11 2.1 菌种 12 2.2 培养基 12 2.2.1 培养基和缓冲液的配制 12 2.2.2 人工海水的配制 12 2.3 实验试剂与仪器 13 2.3.1 试剂 13 2.3.2 仪器 13 2.4 实验方法 14 2.4.1抗肿瘤活性菌株的筛选 14 2.5细胞毒性试验（MTT法） 15 2.5.1 MTT法溶液的配制 15 2.5.2 肿瘤细胞的培养 15 2.5.3 供MTT活性检测用样品的制取 16 2.5.4 MTT法实验步骤 16 2.3 活性代谢产物的初步分离 16 2.3.2 薄层层析分离及展开剂条件的摸索 17 2.3.3 利用自制薄层硅胶板制备活性活性产物 18 2.3.4 Sephadex LH-20分离代谢产物 18 3 结果与分析 20 3.1MTT检测结果 20 3.1.1乙酸乙酯粗提物的MTT结果 20 表3-1 F-1-1粗提物对细胞B-16抑制率 20 3.1.2 HPLC分离组分的MTT结果 20 表3-2 F-1-1 HPLC分离组分对细胞B-16抑制率 20 3.2 F-1-1代谢产物样品的全波长扫描 20 3.3 柱分离结果 19 3.4 HPLC 条件优化[18] 20 3.4.1 HPLC 流动相溶剂配比最佳条件摸索 20 3.4.1.1 对总样品条件的摸索： 20 4 讨论 24 5结论 25 摘要 本论文利用Sephadex LH-20、HPLC以及制备薄层层析等方法对F-1-1液态发酵产生的代谢产物进行了部分分离对代谢产物用 Sephadex LH-20进行分离，并进行 HPLC 条件优化。HPLC 分离的最佳条件为：流动相流速为 1.0 ml/min,检测波长为 nm，流动相最佳配比 ，柱温为常温。 关键词：海洋真菌；抗肿瘤；MTT法；F-1-1； Abstract In this thesis, Sephadex LH-20, HPLC and thin-layer chromatographic method of preparation of the marine fungus F-1-1 liquid fermentation metabolites were part of the separation of metabolites of crude extracts and column fractions B -16 MTT test tumor cells do get crude extracts inhibit the B-16 cells was 72.31%, column fractions, compared with -63.48% inhibition, -25.05%, -10.00%, 3.01%. Right, metabolites using Sephadex LH-20 separation, conditions: 50% methanol elution under 30 minutes, then 75% methanol elution for 20 minutes. And HPLC separation conditions were optimized. The best HPLC separation conditions: mobile phase flow rate was 1.0 ml / min, detection wavelength was 210 nm, mobile phase, the best ratio of 30-40% acetonitrile gradient elution, the column temperature was at room temperature (29 ℃) Key words: Marine fungi; Anti-tumor activity; MTT assay; F-1-1; HPLC 1引