狗蔷薇细胞分裂素氧化酶基因RcCKX5的克隆及表达分析.doc

园 艺 学 报 2014，41（7）：1418–1426 http: // www. ahs. ac. cn Acta Horticulturae Sinica E-mail: yuanyixuebao@126.com 收稿日期：2014–03–12；修回日期：2014–05–06 基金项目：国家自然科学基金项目 * 通信作者 Author for correspondence（E-mail：Zhaolj5073@） 狗蔷薇细胞分裂素氧化酶基因 RcCKX5 的克隆 及表达分析 王 玲，高 彬，温 超，郗 琳，刘凤栾，马 男，赵梁军* （中国农业大学观赏园艺与园林系，北京 100193） 摘 要：利用RACE技术从狗蔷薇（ Rosa canina ）类根体中克隆得到1个细胞分裂素氧化酶基因cDNA 全长，命名为 RcCKX5 。序列分析表明， RcCKX5 cDNA全长1 815 bp，5′ UTR 104 bp，ORF 1 626 bp，3′ UTR 85 bp，编码541个氨基酸，具有CKX家族典型的FAD（黄素腺嘌呤二核苷酸）结合域和CK（细胞分裂 素）结合域。氨基酸序列多重比对和系统进化树分析显示RcCKX5与可可TcCKX5亲缘关系最近，与拟 南芥AtCKX5、乌拉尔图小麦TuCKX5同源性较高。荧光定量PCR分析表明，狗蔷薇 RcCKX5 在其根、 茎、叶、花、果实中均有表达，根中相对表达量最高，花和果实中相对表达量较高。在狗蔷薇类根体形 成发育过程中 RcCKX5 的相对表达量不断升高，21 d时达到最高，随后稍有下降，表明其可能参与了类 根体的形成。6-BA处理结果表明 RcCKX5 能够快速响应6-BA的诱导，表达量显著上调，2.5 mg · L-1 6-BA 处理120 h时， RcCKX5 的相对表达量达到最高峰。 关键词：狗蔷薇；类根体；细胞分裂素氧化酶；表达分析 中图分类号：S 685.12 文献标志码：A 文章编号：0513-353X（2014）07-1418-09 Isolation and Expression Analysis of Cytokinin Dehydrogenase Gene RcCKX5 in Rosa canina WANG Ling，GAO Bin，WEN Chao，XI Lin，LIU Feng-luan，MA Nan，and ZHAO Liang-jun* （ Department of Ornamental Horticulture and Landscape Architecture ， China Agricultural University ， Beijing 100193， China ） Abstract：Protocorm-like bodies（PLBs）is a new protocol of efficient regeneration，and the development of rhizoids is a critical stage of PLB regeneration. Recent researches showed that cytokinin regulated the formation of rhizoids. Here，we isolated the full length cDNA of a gene encoding cytokinin dehydrogenase from rhizoids of Rosa canina ，named RcCKX5 . Sequence analysis indicated that RcCKX5 consisted of 1 815 bp，with ORF of 1 626 bp，5′ UTR of 104 bp，3′ UTR of 85 bp，encoded 541 amino acids. The deduced amino acids possessed conserved domains of CKX family，FAD-binding domain and cytokinin-bining domain. Multiple sequence alignments and phylogenetic analysis showed that RcCKX5 ha