Sphingomonas+sp.ZUTE03产辅酶Q-%2c10-发酵提取新工艺的研究.pdfVIP

Sphingomonas 摘要 辅酶Qlo(CoenzymeQlo，简写为CoQlo)，又称泛醌，本质上是一 种类维生素类物质，脂溶性苯的衍生物。其在自然界中分布广泛，主 要存在于酵母、植物叶子和种子及动物的心脏、肝脏和肾脏中。辅酶 Q。o是细胞呼吸链上的一种递氢体，是细胞自身产生的天然抗氧化剂、 细胞代谢激活剂。本论文对辅酶Q。o的同步皂化提取工艺、发酵萃取 耦合产辅酶Qlo较佳工艺条件、对羟基苯甲酸等前体物质、无机盐添 加对发酵产辅酶Q。o的影响，以及产物的纯化进行了研究。 sp． 本文对自行筛选获得的鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas ZUTE03)发酵产辅酶Qlo的皂化提取工艺进行了改进，设计了同步 皂化提取新工艺，进行菌体中辅酶Qlo的提取，通过正交方法确定了 取溶剂体积30mL。该工艺提取溶剂回收率均达到50％以上。并对提 取样品进行了纯化分离和定性分析。无水乙醇为洗脱液的硅胶柱层析 可以初步分离纯化提取样品，通过TLC、HPLC、显色反应的检验鉴 定，以及全波长扫描的佐证，可以初步确定该菌发酵合成产物为氧化 型辅酶Qlo。 探索了发酵萃取耦合工艺对Sphingomonassp．ZUTE03产辅酶 sp． ZUTE03)的辅酶Qlo产量。单因子试验确定了该工艺的较佳工艺条 件为：2％豆油为细胞通透剂并在发酵起始时加入培养液，以30mL正 己烷为萃取溶剂并在发酵30h后加入培养液，发酵萃取8h，最终辅 酶Qlo的产量可达32．51mg／L。 考察了对羟基苯甲酸添加对Sphingomonassp．ZUTE03菌辅酶 Q，o合成的影响。该前体的添加对菌体中辅酶Q。o合成有较为显著的 促进作用，并确定了其较佳添加条件为：以水为溶解体系，于发酵培 养基中摇床培养6h后，加入对羟基苯甲酸溶液，终浓度为15mg／L， 继续发酵培养18h，进行前体转化反应，实验结果能达到最高产值 69．9 1mg／L。 sp．ZUTE03菌产 考察了添加甘油、Fe2+和M92+对Sphingomonas 辅酶Q。o的影响。甘油的添加对辅酶Q。o的合成有一定的促进作用， 其添加浓度为1％时，产量可达15．83mg／L，相对空白对照提高了 为lmmol／L，Sphingomonassp．ZUTE03菌体生长量以及辅酶Qlo的产 量都能达到较理想值。 关键字：Sphingomonassp．ZUTE03，辅酶Q10，发酵，提取 II NOVELTECHNOLOGYFORCOENZYME STUDYON PRODUCTIONBY Q一10 SP日姗0A织删SSP．ZUTE03 ABSTRACT a it benzoquinonelipid，and CoenzymeQlo(CoQio)wasprenylated wasalsonamed werefoundin CoQlo microorganisms， ubiquinone．The the of functionedas animals，wherethey plants，andheart，kidney，liver