核酸适配体功能化近红外量子点结合流式细胞术快速检测白血病细胞.pdfVIP

Vo1．35 高 等 学 校 化 学 学报 No．10 2014年 10月 CHEMICALJOURNALOFCHINESEUNIVERSITIES 2093～2099 doi：10．7503／cjc 核酸适配体功能化近红外量子点结合流式 细胞术快速检测 白血病细胞 汤进录 ，，石 慧 ’ ，何晓晓 ，王柯敏 ’。，李 朵 ’。，颜律安 ， 雷艳丽 ，刘剑波 ，， (1．湖南大学化学生物传感与计量学国家重点实验室，2．化学化工学院，3．生物学院， 4．生物纳米与分子工程湖南省重点实验室，长沙410082) 摘要 利用作为肿瘤细胞识别分子的核酸适配体 (Aptamer)的高特异性和高亲和力以及作为信号报告单元的 近红外量子点(QDs)的高荧光发射强度和低生物背景干扰特性，构建了一种基于Aptamer功能化近红外QDs 的新型纳米荧光探针 ，并进一步结合流式细胞术在单细胞荧光分析方面的高通量、简便和快速等优势，建立 了一种检测 白血病细胞的新方法．以基于Cell—SELEX(Cell—basedsystematicevolutionofligandsbyexponential enrichment)技术针对 CCRF—CEM人急性 白血病细胞筛选的特异性 AptamerSgc8c为模型，构建了Sgc8c-QDs 探针 ，其仅需与细胞样品培育30min即可实现对缓冲液和血清中靶细胞的简单、快速和高特异性检测．与 传统荧光染料标记技术相比，该方法不仅大大提高了分析灵敏度，还显示 出对血清等复杂生物样品的高适 用性和优 良检测性能．鉴于Cell—SELEX技术在其它白血病细胞 Aptamer筛选领域的应用潜力，该方法有望 作为一种通用技术在 白血病诊断及预后监测等方面发挥重要作用． 关键词 核酸适配体 ；量子点；流式细胞术；白血病 ；癌细胞检测 中图分类号 0657．3 文献标志码 A 白血病是一类因造血干细胞恶性克隆导致的疾病…，属于恶性肿瘤的一种，在儿童和35岁以下 致病人群中占据恶性肿瘤致死率的首位 ]，严重威胁着人类的生命健康．发展高灵敏度、高特异性的 白血病细胞检测方法，以实现其早期诊断进而实施及时、有效的治疗，对于提高患者治愈率和生存率 具有至关重要 的意义． 传统的白血病细胞检测和分型主要基于细胞形态学检查 J，辅以血细胞化学染色技术 J，较强依 赖于主观性和技术经验，无法对分化差或杂合型 白血病进行有效鉴别 J，且 由于不能提供肿瘤细胞相 关分子信息，对后续治疗及预后监测意义不大．近年来，基于 白血病细胞免疫表型变化的免疫学诊断 方法在临床检测中的应用 13趋广泛 J．特别是基于流式细胞术的白血病免疫分型技术，以血细胞簇分 化抗原 (Clusterofdifferentiation，CD抗原)为分子靶标 ，利用荧光染料标记的单克隆抗体为分子探针， 通过流式细胞仪能够实现单个细胞免疫学特征的准确定性及定量分析 ．与免疫荧光显微镜技术及免 疫酶标记技术相比，该方法更为简单、快速、省时 j，在 白血病诊断及预后分析方面显示出广阔的应 用前景．然而，该方法在实际应用中仍然面临较大挑战．由于该方法以“抗原．抗体”反应为基础，必将 受到蛋 白质抗体筛选周期长、成本高、保存和反应条件适应性差等缺陷的不利影响；另外，由于该方 法采用荧光染料小分子为信号报告探针，其检测灵敏度和稳定性受到荧光染料本身存在的信号强度低 和易光漂 白等不足的极大限制． 收稿 日期 ：2014~6—11．网络出版 日期：2014439—30． 基金项 目：国家自然科学基金 (批准号2122100321322509和中央高校基本科研业务费资助 联系人简介 ：王柯敏，男，博士，教授，博士生导师，主要从事纳米尺度和分子水平上的生物分析化学研究． E—mail：kmwang@ hnu．edu．cn 何晓晓，女，博士