2.6固定化酶.pptVIP

第二部分酶的应用 实验6 α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测 酶的固定化方法 酶的固定化方法 酶的固定化方法 四种固定化酶制备方法小结 固定化后酶性质的改变 固定化酶的应用实例 固定化酶的应用实例 淀粉水解过程 4.实验步骤 ④用10倍体积的蒸馏水洗涤此注射器以除去未吸附的游离淀粉酶，流速为1ml/min。 4.实验步骤 4.实验步骤 3、实验后，用10倍柱体积的蒸馏水洗涤此柱，放置在4℃冰箱中，几天后重复上述实验，看是否有相同效果。 * * 实际问题： 实验6 α-淀粉酶的固定化 及淀粉水解作用的检测 ②溶液中的酶很难回收，不能被再次利用，提高了生产成本，且不利于工业化使用。 ①酶在水溶液中很不稳定。 ③反应后酶会混在产物中，可能影响产品质量。 将水溶性的酶用物理或化学的方法固定在不溶于水的载体（即介质）上，使之不溶于水而又有酶的活性。使用时将固定在载体上的酶与反应物接触，催化反应后与产物分离，这样酶可以被反复利用，被称为固定化酶。 固定化后酶性质的变化 固定化酶的应用实例 α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测 实验6 α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测 酶制剂的提取和优点 课后练习 1、酶制剂的概念和种类 酶制剂的提取和优点 含有酶的制品 ①定义： 多酶片、加酶洗衣粉中的蛋白酶和脂肪酶 ②种类： A、液体酶制剂 治疗某些胃病的胃蛋白酶液 B、固体酶制剂 2、酶的生产 ①提取法 采用一定的技术直接从动植物或微生物的组织、细胞中将酶提取出来 实例：在屠宰厂，可以从家畜胰脏中提取出胰酶；在水果加工厂，可以从菠萝皮中提取出菠萝蛋白酶 ②发酵法（常用方法） 通过微生物发酵获得酶 实例：果胶酶（黑曲霉、苹果青霉） 3、酶制剂的优点 催化效率高、低能耗、低污染等 1、吸附法： 通过载体表面和酶分子表面间的次级键（氢键、疏水键等）相互作用而将酶吸附到固体吸附剂表面的方法。固体吸附剂多为活性炭、多孔玻璃等。 2、包埋法： 将酶包埋在高分子凝胶细微网格中或高分子半透膜中。分网格型、微囊型两种。（聚丙烯酰胺包埋最常用） 3、共价偶联法： 酶的功能基团和固相支持物表面上的反应基团之间形成共价键，从而将酶固定在支持物上。 4、交联法： 不使用载体，利用双功能或多功能试剂在酶分子间、酶分子与惰性蛋白间以及微生物细胞间进行交联反应，把酶分子彼此交叉连接起来，形成网络结构。（利用共价键） 不可能 不可能 不可能 可能 再生 中 高 中 低 固定化费用 有变化 有变化 无变化 无变化 底物专一性 中 中 高 高 酶活力 强 强 强 弱 结合力 难 难 易 易 制备 交联法 共价偶联法 包埋法 物理吸附 制法 特性 1、固定化对酶活性的影响：酶活性下降，反应速度下降 （1）操作稳定性提高； 2、固定化酶对酶稳定性的影响：提高 （2）贮存稳定性比游离酶大多数提高； （3）对热稳定性，大多数升高，有些反而降低； （4）对变性剂的耐受力升高。 ——固定化酶技术生产高果糖浆 葡萄糖 果糖 反应柱 固定化酶 分布着小孔的筛板 固定化酶反应柱 （葡萄糖异构酶） 1.如何制备固定化酶？ 将酶固定在一种颗粒状的载体上，再将这些酶颗粒装到一个反应柱内。柱子底端装上分布着许多小孔的筛板，酶颗粒无法通过筛板上的小孔，而反应溶液却可以自由出入 2.如何使用？ 生产过程中，将葡萄糖溶液从反应柱的上端注入，使葡萄糖溶液流过反应柱，与固定化葡萄糖异构酶接触，转化成果糖。从反应柱的下端流出。 葡萄糖 果糖 反应柱 固定化酶 分布着小孔的筛板 固定化酶反应柱 （葡萄糖异构酶） 3.有何优点？ 反应柱能连续使用半年，大大降低了生产成本，提高了果糖的产量和质量。 ——固定化酶技术生产高果糖浆 一定浓度的底物——淀粉溶液经过固定化酶柱，水解产生糊精。 1、实验原理： 淀粉 糊精 石英砂 α-淀粉酶 反应柱 分布着小孔的筛板 (1)制备固定化α-淀粉酶 用吸附法将α-淀粉酶固定在石英砂上。 (2) 固定化α-淀粉酶催化的反应 (3)淀粉水解的检测 用淀粉指示剂溶液——KI—I2溶液测试。淀粉遇碘显蓝色，而水解产物糊精遇碘呈红色。 α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测 α-淀粉酶 淀粉 糊精 遇碘 显蓝色 β-淀粉酶 麦芽糖 糖化淀粉酶 葡萄糖 遇碘 显红色 遇碘 不显色 这里使用的是枯草杆菌的a-淀粉酶，其作用的最适温度为50~75℃；最适PH为5.5~7.5 2、实验材料： α-淀粉酶（取自枯草杆菌，最适pH5.5～7.5；最适温度50～75℃） 3、实验试剂、用具： 蒸馏水、KI—I2溶液、石英砂、可溶性淀粉溶液 50ml烧杯3、滴