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ICS65.020.20 B31 DB32 江苏省地方标准 DB XX/ XXXXX—XXXX 大蒜脱毒快繁技术规程 Technical regulations for rapid propagation of virus-free garlic 点击此处添加与国际标准一致性程度的标识 XXXX - XX - XX发布 XXXX - XX - XX实施 江苏省质量技术监督局发布 前言 本标准按照GB/T 1.1-2009《标准化工作导则 第 1 部分：标准的结构和编写》编制。 本标准由江苏徐淮地区徐州农业科学研究所提出。 本标准起草单位：江苏徐淮地区徐州农业科学研究所。 本标准主要起草人：杨峰、陆信娟、樊继德、张允刚、李勇。 大蒜脱毒快繁技术规程 范围 本标准规定了大蒜脱毒快繁技术培养基、外植体、接种、培养、病毒检测、驯化与培育。 本标准适用于江苏省大蒜茎尖脱毒快繁。 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 NY/T 405-2000 脱毒大蒜种蒜（苗）病毒检测技术规程 培养基 初代培养基 初代培养基诱导单个大蒜茎尖产生丛生芽（表1）。 增殖培养基 增殖培养基诱导试管丛生芽产生鳞茎（表1）。 生根培养基 生根培养基诱导试管丛生芽生根（表1）。 大蒜初代培养基、增殖培养基与生根培养基配制表 培养基类型 初代培养基 增殖培养基 生根培养基 基础培养基 B5 1/2 B5 1/2 B5 6-BA 5mg/L 2mg/L 0.01 mg/L KT 1mg/L — — IAA 0.01mg/L 0.1mg/L — NAA — 0.1mg/L 0.05 mg/L 活性炭 — — 0.2% 蔗糖 20g/L 50 g/L 20g/L 琼脂 6g/L 6g/L 6g/L 外植体 外植体选取 选择种性纯正，生长势强的大蒜品种作为脱毒外植体。 外植体处理 外植体取样时间 5～6月份为外植体最佳取样时间。 外植体处理方法 大蒜鳞茎于0～5℃冰箱冷藏3～8周（因品种而异）。 外植体接种 茎尖消毒 将鳞芽保护叶剥离，切除鳞茎贮藏叶大部分，保留含茎尖体积约为3mm×2mm×3mm块状，移到超净工作台上，先用75%乙醇（酒精）浸润3s～5s，再用配制好的20%次氯酸钠溶液中浸泡6min～8min，之后用无菌水冲洗4～5次，再用无菌滤纸吸去表面水分，置于无菌培养皿中备用。 茎尖剥取 将消过毒的茎尖置于40倍体视显微镜（双筒解剖镜）下，用解剖针逐次去掉幼叶，直至露出光滑的茎尖，用解剖刀切取含茎尖的生长点0.1mm～0.3mm。 接种 用接种针将生长点移至初代培养基，每个容器接种一个生长点，酒精灯上烘烤试管（瓶））口和纱布棉球纸帽或封口膜（盖）后封口，在管（瓶）壁上注明品种、编号和接种日期等内容。 培养 培养条件 培养条件为温度23℃～25℃、光照强度25μmol·m-2·s-1～37.5μmol·m-2·s-1、光照时间14h～16h/d，相对湿度60%以上。 培养时间 培养30d～40d看到茎尖生长出8～10个芽且明显伸长，呈绿色。 鳞茎诱导 将丛生芽转入增殖培养基进行培养，经过2～3个月后，试管内形成脱毒微鳞茎。 生根诱导 有小叶发生时将小茎芽转入装有生根培养基，经4～5个月可发育成2～3个叶片的初代苗。 病毒检测 检测方法按照NY/T 405-2000脱毒大蒜种蒜（苗）病毒检测技术规程进行，最后选留在封闭容器内繁殖的无OYDV、GCLV的再生苗株系作为脱毒试管苗。 试管苗驯化与培育 驯化前处理 脱毒试管苗在移栽前打开瓶塞，加入自来水（加水量高于培养基表面0.5 cm），同时关闭空调于室温炼苗3天。取出试管苗，洗净培养基，保湿待栽。 土壤选择 选择未种植过葱蒜类蔬菜，有机质丰富、土层深厚、排水良好的微酸性沙质田块。 整地施肥 深翻细耙，深度20 cm～30 cm。在翻地时亩施充分腐熟有机肥3000 kg～5000kg，三元复合肥（有效成份含量N－P205－K20=12－16－18）47 kg，尿素(N=46%)24kg。 防虫网室设立 防虫网选用40目，于移栽之前1～2个月覆盖。 移栽 株行距6cm×8cm。定植后插小拱棚覆膜保温保湿。 追施肥水 越冬前喷水1次，开春后（3月上旬）结合浇水亩施尿素约10 kg。4月上旬结合浇水亩施尿素约10 kg，利于蒜苗生长。4月下旬至5月上旬结合浇水亩施尿素约10 kg，促进蒜头生长。 _________________________________ DBXX/ XXXXX—XXXX I