第二十章生物制品分析LLQ精品.pptVIP

生物制品分析概论 生物制品的质量标准有别于其他商品，强调其特殊性： 1、安全性：安全使用，副作用小 2、有效性：使用后能产生相应的效力 3、可接受性 （4）免疫斑点法 （5）酶联免疫法: 利用酶标记抗原（抗体），通过酶促显色反应，可以直接观察特征颜色变化来测定抗体（抗原）。 一、理化检定 （一）物理性状检查 （二）蛋白质含量测定 （三）防腐剂和灭活剂 （四）纯度检查 （五）相对分子质量或分子大小测定 二、安全检查 （一）安全检查对象 1.菌毒种和原材料 2.半成品 3.成品 三、效力测定 1.免疫力试验 2.活菌数和活病毒滴度测定 3.血清学试验 （4）中和反应 抗体与病毒或毒素结合，使病毒或毒素失去致病力或毒性。 （二）肽图分析 根据蛋白质、多肽的分子量大小以及氨基酸组成特点，使用专一性较强的蛋白水解酶（一般为肽链内切酶）作用于特殊的肽链位点将多肽裂解成小片断，通过一定的分离检测手段形成特征性指纹图谱。 溴化氰裂解-SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE） 胰蛋白裂解-反相高效液相色谱（RP-HPLC） 胰蛋白酶裂解-毛细管区带电泳（CZE） 结合N-末端氨基酸序列分析，是蛋白质类生物制品精确的鉴别方法 （一）来源于生物体 （二）制造过程涉及生物材料和生物学特征 （三）工艺存在易变性和安全性问题 生物制品生产的特点 生物制品危险因素：异源物质、不稳定、易受微生物污染 第四节 生物制品检查内容 （一）过敏性物质检查 （二）杀毒、灭活和脱毒检查 （三）毒性物质检查 （四） 外源性污染检查 （二）、安全性检查内容 过敏反应检查： 检查异性蛋白 豚鼠试验法 毒性检查：疫苗类生物制品是否存在自身毒素引起的特异性毒性的不安全因素 小鼠试验法 豚鼠试验法 外源性污染检查：是否污染外源性毒性物质以及是否存在意外的不安全因素 3. 血清学法 体外抗原抗体试验 经典血清学反应： （1）凝集反应 （2）沉淀反应 （3）补体结合反应 （4）中和反应 经典血清学反应： （1）凝集反应 颗粒性抗原（完整的病原微生物或红细胞等）与相应抗体结合，在有电解质存在的条件下，经过一定时间，出现肉眼可见的凝集小块。 （2）沉淀反应 可溶性抗原与相应的抗体混合，在电解质存在的条件下，两者比例适合，即可有沉淀物出现。沉淀反应抗原多系胶体溶液，沉淀物主要是由抗体蛋白所组成。 （3） 补体结合反应 可溶性抗原与相应抗体结合后，抗原抗体复合物可以结合补体，但这一反应肉眼不能察觉，加入红细胞和溶血素，即可根据是否出现溶血反应来判定反应系统中是否存在相应的抗原或抗体。 一、一般杂质检查 二、特殊杂质检查 三、安全性检查 杂质检查 检查项目：氯化物、硫酸盐、铵盐、铁盐、重金属、酸碱度、溶液的澄清度与颜色、水分及干燥失重、炽灼残渣等。 检查方法：同化学药物 一、一般杂质检查 检查意义： （1）特殊杂质可能存在的毒性会引起安全性问题 （2）可能影响产品的生物学活性和药理作用 （3）反映产品生产工艺的稳定性 主要特殊杂质： 生物污染物、产品相关杂质、工艺添加剂 二、特殊杂质检查 主要特殊杂质：生物污染物 （1）微生物 （2）细胞成分 （3）培养基成分 （4）有关大分子物质 二、特殊杂质检查 宿主细胞、外源性DNA 牛血清白蛋白 重组制品中的鼠IgG 主要特殊杂质：产品相关杂质 （1）二聚体和多聚体 （2）脱氨或氧化产物 （3）突变物 （4）错误裂解产物 （5）二硫化物异构体 二、特殊杂质检查 主要特殊杂质：工艺添加剂 （1）残余抗生素 （2）蛋白分离剂（聚乙二醇、乙醇） （3）佐剂氢氧化铝 （4）产品稳定剂（辛酸钠、肝素） （5）防腐剂（苯酚、硫柳汞等） （6）细菌与病毒灭活剂（甲醛等） 二、特殊杂质检查 （一）宿主细胞蛋白残留量的检查 检查目的：控制异源蛋白的含量，以防超量后引起机体免疫反应 检查方法：酶联免疫吸附剂测定法－ELISA 二、特殊杂质检查 （二）外源性DNA残留量的检查 检查目的：防止外源性DNA对人类的危害 检查方法：分子杂交技术、基于DNA结合蛋白的分析技术、实时定量PCR技术 二、特殊