短QT综合征的分子遗传及细胞电生理机制的研究.pdf

摘要 摘要 背景和目的： 短QT综合征(shortQT cardiac 期伴室性心动过速(室速)、心源性猝死(suddendeath，SCD)、阵发性 心房颤动(房颤)为特征，而心脏结构正常的一类遗传性离子通道疾病。到目 前为止，已先后发现6个编码钾通道和钙通道亚单位致病基[N(KCNH2、KCNQl、 遗传性心脏离子通道病。LQTS和SQTS是表型相反的两种心脏复极化异常疾病。 今为止，尚无SCN5A基因突变在LQTS相反表型．SQTS中的报道。 据目前资料信息，除了国人SQTS中发现KCNH2基因突变报道外，系统性 对国人SQTS的研究报道罕见。因此，筛查我国SQTS患者的致病基因及其突变 位点，揭示国人SQTS分子遗传机制及电生理发病机制是本研究主要目标。结合 国人SQTS基因型研究结果，初步筛选有效的针对国人SQTS的抗心律失常药物， 是本研究另一个目的。 材料和方法： 临床资料收集 按照国际短QT综合征诊断指南(国际心电图指南2010)，收集QT间期缩 短(QTc、370ms)的患者以及家族成员资料。所有患者进行详细临床评估，以及 排除继发性QT间期缩短因素。 基因筛查 直接测序法进行筛查。100个相同种族背景的健康个体作为对照，以鉴别罕见基 摘要 因突变与普通基因多态性。根据最新SQTS诊断标准，对每位患者进行评分。 体外突变诱导及细胞转染 通过定点突变诱导技术，对携带野生型SCN5A cDNA的pcDNA3．1+进行突 E428G 变诱导。 诱导突变引物如下： 正向引物 和 反 向 引 物 5’gctgagaccgGggagaaggaaaagcgcttcca93’ 1951L正向引物sense5’ 5ttccttctccCcggtctcagcgatggtggctt93’：Vprimer 3’ 和 反 向 引 atcgcctacTtgatgagtgagaacttctc 物primer S1653S 正向引物 sense 5tcactcatcaAgtaggcgatgaggccctc3’： primer 和 反 向 引 物 5tgccctcatgatgtcActgcctgccctcttcaacatc93’ R689H 正 向 引 物 5tgaagagggcaggcagTgacatcatgagggcaaagagc3’． 变诱导后进行DNA测序验证，以及排除由PCR导致非目的碱基改变。通过脂 质体转染突变型及野生型SCN5A表达质粒，至人胚。肾(HEK)293细胞进行表达。 细胞膜片钳电生理分析 应用全细胞膜片钳技术对HEK293细胞表达的离子通道功能进行检测。分 析野生型通及突变型通道的电生理特征，如电流密度、峰值，门控特性如电压 依赖的稳态激活(SSA)及稳态失活(SSI)等。对抗心律失常药物乙胺碘呋酮 (胺碘酮)、美西律以及普罗帕酮作用突变通道的效果进行评价，以筛选经济、 有效的SQTS治疗药物。所有记录均在室温下进行。 结果： 临床特征 共入选符合条件无相关患者lO例，QTc261．362ms，年龄15．48岁，女性患 者3例。