蟹多拷贝串联重组金属硫蛋白基因的原核表达载体构建及表达.pdf

广州医学院硕士论文 蟹多拷贝串联重组金属硫蛋白基因的原核表达载体构建及表达 蟹多拷贝串联重组金属硫蛋白基因的原核 表达载体构建及表达 中文摘要 金属硫蛋白由于富含Cys残基（30% 以上）且Cys残基都是以还原态结合金属离 子存在等独特的理化性质，使得其在抗氧化作用、清除自由基和重金属解毒等方面 具有独特的功能，从而在科学研究上引起了人们高涨的热情，在实际应用中具有极 高的应用价值，尤其在医药、保健等领域。但目前金属硫蛋白主要源于动物内脏提 取物,存在提取量小、制备成本高、部分重金属污染等方面的问题。为解决这一难题， 在前期研究成果的基础上，本研究利用原核表达载体pET-15b 和大肠杆菌 BL-21(DE3)PlysS构建了含2拷贝和3拷贝的中华绒螯蟹金属硫蛋白基因的多拷贝串 联重复原核表达系统。在摸索了最佳培养和诱导条件后，成功高效地表达了含2拷贝 和3拷贝串联的金属硫蛋白,表达主要以包涵体的形式出现，且目标蛋白表达量分别占 菌体总蛋白量的40%和45% 。通过发酵罐发酵技术高效地获取了目的蛋白，验证了工 业化大规模制备金属硫蛋白的可行性，成功解决了金属硫蛋白的大量廉价获得难题，