原料乳中两种病原菌双重PCR检测方法的建立和应用.pdf

摘 要 近年来，随着乳制品行业规模化生产的快速发展，由乳及乳制品的安全问题所引 发的乳源性疾病，特别是细菌性食物中毒事件时有发生。因此，对乳源性病原菌的检 测研究受到了前所未有的重视。大量研究结果表明金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和致病性大肠杆菌(pathogenic Escherichia coli)是污染原料乳的两种最常见的 人畜共患病病原菌，它们通过引发乳及乳制品的腐败变质，进而导致人畜共患病和人 类食物中毒的发生。为此，加强原料乳及乳制品中金黄色葡萄球菌和致病性大肠杆菌 的检测对预防和控制乳源性疾病的发生和流行显得至关重要。本研究在建立可同步检 测金黄色葡萄球菌和致病性大肠杆菌的双重PCR方法的基础上，对合肥地区采集的新 鲜原料乳以及市售乳制品进行上述两种病原菌检测，以期探明原料乳及乳制品的污染 状况。 首先，建立了检测金黄色葡萄球菌和致病性大肠杆菌的单一PCR方法。选取金黄 色葡萄球菌耐热核酸酶nuc基因和致病性大肠杆菌粘附素K99基因作为检测目的基因， 根据nuc基因和K99基因的保守区序列，应用Primer5.0软件设计合成2对特异性引物。 在其他因素不变的条件下，通过对引物浓度、模板浓度、退火温度和Mg2+浓度的摸索，