大肠埃希氏杆菌6S-23S rRNA基因间隔区片断分析在粪便污染源示踪上的应用.pdfVIP

摘 要 随着沿海地区人口密度的增加，禽畜养殖业的蓬勃发展，粪便污染已成为 个严重的环境问题。粪便污染带来的有机物、致病菌等，不仅降低海水质量，影 响海水养殖业，同时也给人类的健康带来威胁。粪便污染源往往以非点源污染形 式存在，具有分散性和随机性，因此鳃决近岸海域粪便污染问题的关键是找到并 确认其污染源。 为了解决近岸海域粪便污染问题，本论文采用一种利用粪便微生物追踪其污 染源的方法一一微生物源示踪法。此方法中，基因型示踪技术比较可靠，结合DNA “指纹”(DNA Fingerprint)技术，通过比对同种细菌表现出的遗传多样性“指 纹”图谱，追踪其所在宿主或生存环境，达到污染源示踪的目的。整个实验过程 rRNA 包括，从粪便中分离示踪微生物(E．toll)，提取基因组DNA，进行16S一23S ISR PCR扩增，PAGE电泳，以及图像数据分析，通过特异性DNA“指纹”条带找出 细菌与污染源的联系，最终完成粪便污染源的示踪。 本论文总结出一套快速分离示踪微生物的方法；初步摸索到适用于本实验的 ]6S一23SISR 图谱，通过比较E．cD』，共性和特异性“指纹”带，找出示踪微生物在不同来源粪 便中的多态性，为进一步粪便污染源示踪研究提供理论基础和科学依据。 关键词：粪便污染，微生物源示踪，DNA“指纹”技术，大肠埃希氏杆菌 Abstract Withthe animal coastal and husbandry contamination population increasing，fecal hasbecomea environmentalthataffectedcoastalandinland seriOBS problem many will water andinfluenceseawaterbreed watersworldwide．It degradequality aquatics， asrecreational as associatedwithfecal can aswell activities，suchpathogens pollution human lossesinindustriesthat oncoastalwaters． leadto diseaseandeconomic depend ’rhe duetoan to sources． inabilityreliablyidentifynon·point problempersists，partly whichare and ofthesollrceofthefecalcontamination dispersedsporadic．Identification isthe ofthe fecalcontaminationofseawater． key solving in this Inordertosolvethe offecalbacteriacontaminated problem waters，inpaper,