东南景天和鸭跖的遗传多样性研究及镉耐性基因克隆.pdfVIP

摘要 东南景天和鸭跖草遗传多样性研究 及镉耐性基因克隆 专 业：环境科学 博士生：邓金川 指导教师：蓝崇钰教授 摘要 重金属超富集植物对重金属具有强耐性和超富集的特性，是研究重金属胁迫 下植物适应和系统进化非常理想的材料。东南景天(SedumalfrediO和鸭跖草 (Commelinacommunis)分别是近年来在我国境内发现的锌／镉超富集植物和铜富 集植物。本研究一方面通过调查这两种植物在矿山和非矿山生境中的分布，分析 测试所调查的样地和植物的重会属含量，进而用RAPD方法分析植物种群的遗 传多样性，试图找出超富集植物耐性或富集特性进化的一般规律；另一方面，选 用东南景天Cd耐性／富集能力最强的矿山种群为材料，利用SSH方法构建其在 Cd胁迫下的差减eDNA文库，筛选Cd耐性／富集基因，从分子水平去阐释Cd 耐性／富集特性。本研究的主要结果总结如下： 1．东南景天共采集到2个对照和5个污染种群，这5个污染种群由于受采 矿活动影响，土壤中Zn、Cd、Pb污染非常严重，植物体内的重金属含量也非常 高，并且有一个种群(QZ，采自浙江衢州)的Zn、CA含量符合超富集植物的标 准。而鸭跖草在长江中下游的铜矿区共采集了7个污染种群以及相应的7个对照 种群，同样由于土壤中Cu污染严重，7个污染种群的Cu含量也很高，有三个种 群的根系cu含量超过1,000mgkg1。 2．RAPD结果显示，与对照种群相比，东南景天的矿山污染种群的遗传多样 性水平极显著下降，并且发现种群的遗传多样性水平与样地土壤重金属污染状况 呈显著负相关。因此，可以推测重金属胁迫使东南景天的种群发生过瓶颈效应和 邓金川东南景天和鸭跖草的遗传多样性研究及镉耐性基因克隆 奠基者效应，导致其遗传多样性下降。然而，鸭跖草虽然种群问的遗传多样性变 化很大，但矿山污染种群与对照种群之间没有显著性差异，这可能是种群间的基 因流或连续的定居事件平衡了因瓶颈效应和奠基者效应产生的遗传多样性的下 降。 3．AMOVA分析和UPGMA聚类表明，东南景天和鸭跖草种群间的遗传分化 极显著。其中，东南景天的7个种群被分为污染、对照和QZ(三大类群；而鸭 跖草的14个种群直接被分为污染和对照两大类群。这说明土壤重金属污染对东 南景天和鸭跖草的遗传分化起重要作用。另外，种群阳J的遗传距离与地理距离的 相关性分析表明，地理隔离对污染种群问的遗传分化没有影响，但在对照种群问 的遗传分化过程中有显著影响。因此，可以推测重金属胁迫是超富集植物进化的 关键因子。 4．根据植物外形、金属耐性／富集特性以及RAPD结果，东南景天的QZ种 群可能已进化为一种新的矿山生态型或亚种。利用东南景天的QZ种群为材料， 以200 L’1 jmlol SSH差减文库，经过测序比对，得到22个与重金属胁迫或其他胁迫下诱导表达 kinase)，脂氧合酶 的有关基因同源性较高的独立克隆，如：蛋白激酶(protein 与MT和HPt 2表达基因同源性高的两个克隆进行Northern杂交，结果初步显示， MT基因可能是东南景天叶中一组成型表达基因，月Pr2基因在Cd胁迫下上调表 达，其可能在Cd胁迫的信号传导中起作用。 关键词：超富集植物；东南景天；鸭跖草；遗传多样性；镉：耐性基因 Ⅱ ABSnLA(了 GeneticdiversitiesofSedum andCommelina alfredii communisandcadmiumtolerantclone gene Major： EnvironmentalScience