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细胞生物学实验 主讲:林弘 张勇 上饶师范学院生命科学系 目 录 1.实验一 细胞膜的渗透性 2.实验二 细胞凝集反应 3.实验三 线粒体的超活染色与观察 4.实验四 叶绿体的分离与荧光观察 5.实验五 线粒体的分离与观察 实验一 细胞膜的渗透性（2课时） 实验目的 1.了解细胞膜对物质渗透性的一般规律。 2.了解溶血现象及其发生机制。 实验原理 细胞膜为一种半透膜，对物质的通透具有选择性。当红细胞放入低渗溶液中时，细胞吸水膨胀而发生溶血。 当红细胞放入含不同溶质的等渗溶液中时，由于细胞膜对不同溶质的透性不同，细胞发生溶血的时间也会不同，故发生溶血现象时间长短可作为测量物质进入红细胞速度的一种指标。 实验操作 1．从集市买一只活鸡现杀取血5ml（防止污染），放入盛有20ml Alsever,s 液瓶中，混匀后置冰箱保存备用（2 周内使用）。 2. 使用前取用Alsever,s 液保存的新鲜鸡血5ml，加入8ml的0.128 mol/L 的NaCl 溶液，小心混匀，1000 r/min 离心5min，如此3 次洗涤，最后配成30%的鸡红细胞（CRBC）悬液。 3. 取11支试管，按附表中所示测试溶液，分别取样各3ml，作出标记后，各管均加入红细胞悬液2 滴，混匀后静置于温室中，观察各支试管中发生溶血的时间及其变化。 观察结果 1. 试管内液体分两层：上层浅黄色透明，下层红色不透明为不溶血（－），镜检红细胞完好呈双凹盘状。 2. 如果试管内液体混浊，上层带红色者，称不完全溶血（＋或＋＋），镜检有部分红细胞呈碎片。 3. 如果试管内液体变红而透明者，称完全溶血（＋＋＋），镜检发现细胞全部呈碎片。 实验建议 1. 鸡血在离心时，试管均需在扭力天平上平衡。 2. 目测红细胞体积或置于带刻度的离心管中，加入生理盐水配成30%的红细胞悬液； 3. 试管中有红细胞和测试溶液时，不应强力摇晃，以免造成人为的红细胞破裂。 实验报告及作业 书写实验报告，并就细胞膜对不同物质的渗透性不同，对实验结果进行分析见表1。 目测法判断标准：快速溶血：＋＋＋；慢速溶血：＋＋或＋；不溶血：－ 实验二 细胞凝集反应 （1课时） 实验目的 1. 观察血细胞的凝集现象。 2.掌握凝集素促使细胞凝集的原理。 实验原理 ①细胞质膜外表面的一层黏性多糖物质构成的细胞全委会被在细胞间的联系和识别、细胞的生长分化、免疫反应及肿瘤发生等过程中发挥着重要作用。 ②动物细胞表面的糖蛋白、糖脂中的糖链伸向膜表面，它们是细胞识别、细胞免疫及细胞接触抑制现象的必要组分。 ③凝集素是一类含糖的(少数例外)并能与糖专一性结合的蛋白质，它具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。凝集使细胞凝集是由于它与细胞表面的糖分子连接，在细胞间形成“桥”的结果。 ④凝集素与糖分子结合有一定的专一性和结合价，并与细胞膜上受体的分布有关。 实验操作 实验报告 1.绘制简图，表示血细胞的凝集过程； 2.图示血细胞凝集的原理。 实验三 线粒体的超活染色与观察（3课时） 实验目的 1. 观察动、植物活细胞内线粒体的形态、数量与分布。 2. 学习一些细胞器的超活染色技术。 实验原理 ①活体染色：应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些细胞结构而又很少影响细胞生命活动的染色方法。 ②詹纳斯绿B：詹纳斯绿B能专一的对线粒体进行活体染色。线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态，即有色状态，呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。 实验操作 1. 人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色观察 清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上  ↓滴2滴1/5000詹纳斯绿B染液  ↓ 用牙签口腔颊粘膜处稍用力刮取上皮细胞  ↓ 刮下的粘液状物放大载玻片的染液滴中  ↓ 染色10-l5min(注意不可使染液干燥，必要时可再加滴染液)  ↓ 盖上盖玻片,显微镜下观察  2. 小白鼠肝细胞线粒体的超活染色观察 (1) 用脊椎脱臼法处死小白鼠，置于解剖盘中，剪开腹腔，取小白鼠肝边缘较薄的肝组织块，放入表面皿内。用吸管吸取Ringer 液，反复浸泡冲洗肝脏，洗去血液。 (2) 在干净的凹面载玻片的凹穴中, 滴加詹纳绿B 应用液，再将肝组织块移入染液，注意不可将组织块完全淹没，要使组织块上面部分半露在染液外，这样细胞内的线粒体表面可充分得到氧化，易被染色。当组织块边缘被染成蓝绿色即成(—般需染20～30min)。 (3) 吸去染液，滴加Ring