不同保藏方法的美白对虾保藏过程中腐败微生物的动态监测研究.pdf

不同保藏方法的南美白对虾保藏过程中腐败微生物的动态 监测研究 摘要 南美白对虾以其美味及高营养价值深受人们的喜爱，但它也是一种难以保藏 的食品。对虾腐败变质的主要原因是腐败微生物的生长繁殖所导致的。1996年 附11ips等人提出了气调保鲜包装(脚)技术，它具有实用方便、效果明显的特点， 可以应用于水产品的保鲜保藏。 本文将气调保鲜包装技术用于南美自对虾的保藏研究，采用不同组分的气 体，灌充密封保存。实验共分为三组，分别为：非气调保藏的对照组l：直接放 入4℃冰箱中；两种气体气调保藏的组2：经40％C02+60％N2气调包装后于4℃冰 4℃冰箱中保藏，每组三个重复。然后本文应用传统方法、PCR．DGGE技术和克 隆文库技术、电子鼻技术，分析了不同保藏时间的三组南美白对虾样品中腐败微 生物多样性和气味的变化，以及这三种保藏方式的保鲜效果的差别，为南美白对 虾的保鲜提供理论依据和实践参考。 1．不同保藏方法南美白对虾感官品质、pH值、细菌总数变化分析 应用传统方法对南美白对虾保藏过程中的感官品质变化、pH值变化、细菌 总数变化进行了分析。结果显示，三种不同保藏方法的南美白对虾样品的感官得 分都是呈逐渐下降趋势，非气调保藏的组l在第3天感官得分即达到不可接受水 平，而气调保藏的组2和组3样品在第9天才达到不可接受水平。pH值的变化 趋势是，非气调保藏的组1是一直呈上升趋势，而气调保藏的组2和组3的pH 值是先下降后上升，最终组3的pH值高于组2。三种不同保藏方法样品中细菌 总数都是呈上升趋势，组l样品在3天之内细菌总数升高了223倍多，达到了 5．8×105c“g，组2、组3样品在保藏的前3天细菌总数基本没有发生变化，到第 9天时，细菌总数才分别达到5．3×105c她、6．2×105c眺。以上结果初步表明， 南美自对虾采用气调包装在4℃下冷藏保鲜期可达9天，与非气调保藏组l比较， 可延长保鲜期6天左右。 2．不同保藏方法南美白对虾中腐败微生物的分子动态监测研究 应用PCR_DGGE技术对不同保藏方法的南美白对虾样品虾壳和虾肉中腐败 微生物进行了分子动态监测。结果表明：三种不同保藏方法的样品中腐败微生物 组成存在～定差异，而且样品在保藏过程中微生物菌相也在发生变化。气调保藏 的组2和组3样品中微生物菌相变化比非气调保藏的组1缓慢。从DGGE条带 数量来看，气调保藏的组3中的微生物种类相对于气调保藏的组2以及非气调的 组1平均少2条。在非气调保藏的组1样品保藏过程中，当保藏到第3天时优势 腐败微生物DGGE条带数量明显增多、优势条带强度也明显增强：在气调保藏 的组2样品保藏过程中，保藏第3天、第5天时微生物菌相都没有发生非常明显 的变化，当保藏到第7天时，DGGE条带数突然明显增多，但到第9天时，优势 腐败微生物DGGE条带数却明显减少；在气调保藏的组3样品保藏过程中，从 保藏第3天到保藏第7天这段时间内，DGGE条带是逐渐增多的，而且优势条带 强度也明显增强，到第9天时，DGGE条带数却明显减少。对比虾壳与虾肉中腐 败微生物DGGE图谱发现，虾壳和虾肉中腐败微生物组成存在一定差异。对 DGGE图谱上的主要条带进行DNA回收，再进行PCR扩增，测序分析获得4 种不同的细菌。从DGGE图谱可知，希瓦氏菌(鼢Pw册e砌)、不动杆菌 在而且还是相对优势腐败菌，而假单胞菌(Ae“面朋D嬲)在保藏后期逐渐成为 优势腐败菌。 对新鲜的样品、非气调保藏的组1保藏到第3天的样品、气调保藏的组2 保藏到第9天的样品、气调保藏的组3保藏到第9天的共四个样品，构建了四个 样品中微生物群落的16S rDNA克隆文库，文库名称依次为H1、H2、H3、H4。 经过测序之后的序列分析发现，这四个克隆文库组成彼此之间都存在差异。四个 克隆文库共获得了17个优势OTUs，对获得的17个优势OTUs进行进一步的序 (戥而弘D6卯幼f“所)、粪肥菌(】S『w觑P聊口玎甜陀)、交替假单胞菌(AP甜面口抛加mo玎傩)、 发光杆菌(肋D幻6口c纪，-f“加)、气单胞菌(么P，D垅D甩伽)、嗜冷杆菌(风弦^加6口c册)。 另外7个OTUs属于未培养的菌(11ncllltured bac_te血)。17个优势OTUs的代表 序列提交GenBallk后获得的登录号为EU718211一EU718227。