共振光散射新技在有机小分子污染物与生物大分子相互作用中的应用.pdfVIP

西南大学硕士沦文 共振光散射新技术在有机小分子污染物与生物大分子相互作用中的应用 共振光散射新技术在有机小分子污染物与 生物大分子相互作用中的应用 环境科学专业硕士研究生代小霞 指导教师 黄承，6-教授 摘 要 近年来，共振光散射技术(RLS)由于具有操作上的简便性和高度的灵敏性己引起人 们的广泛关注，并成功的应用于分析化学研究的各个领域。例如，共振光散射技术被用于表 征有机染料的聚集，有机染料和金属配合物在生物大分子模板上的堆积，以及药物分子与生 物大分子的相互作用等，广泛用于无机离子、蛋白质、核酸和药物等的测定中。现今，RLS 技术已成为超分子化学、物理化学和分析化学领域中强有力的分析技术。但是，随着共振光 散射技术的进一步发展，其缺陷也日益暴露。首先，共振光散射采用单一波长处的强度作为 其表征手段容易受外界因素的干扰，导致信号不稳定，难以区分待测物质和干扰成分的信号。 其次，RLS技术作为常规分析技术还没有应用于在线检测。因此，有必要进一步发展共振 光散射技术，克服其缺陷，扩展其应用范围。在此基础上，本文提出了共振光散射与流动注 射联用技术、双波长共振光散射比率法以及等离子共振光散射分析法。具体内容包括以下三 个方面： 1．建立了Fib．一RLS联用技术并用于吩噻嚷类染料与肝素相互作用的研究，并对注射液 中肝素的含量进行了测定，主要结果如下： 在近中性介质中，亚甲基兰与肝素作用产生共振光散射(RLS)增强信号，最大散射峰 位于365．0 nm处，增强的共振光散射强度(A／Rzs)与肝素浓度具有线性关系，据此建立了流 动注射．共振光敞射联用技术测定痕量肝索的新分析方法。在pH为7．96，离子强度为O．0275 0 t001．L。的载流中加入肝素后，在365nm处产生增强的RLS信号。采用时问扫描测定该增 强RLS强度，在最佳实验条件下，可检测l～20mg-L。肝索，检出限为8．41¨g一。对浓度 为4．0mgLfl的肝素钠标准液平行测定l1次的相对标准偏差为32％。用于注射液中肝素含 西南大学硕士论文 共振光散射新技术在有机小分子污染物与生物大分子相互作用中的应用 量的测定， RSD小于2．3％。 2．发展了RLS比率法，并将此方法应用于偶氨类染料和蛋白质分子的相互作用以及表 面活性剂在核酸分子上的聚集研究及其分析应用。主要内容是： 样本中的DNA进行了检测。在BR缓冲溶液介质中，fsDNA能与HM1622通过静电作用结合， 其位于300．0nm的特征共振光散射信号大大增强。由此，我们可以通过单波长共振光散射方 mol l-t时，该方法所得到的线性范围和检出限分 法来检测fsDNA，当HM的浓度为6，0×10。5 mol 别3j50--2000ml。和3 ml～。然而，当HM浓度同样为6．0×10‘51-1时，我们使用 ng 0ng 到的线性范围和检出限分别为O．5-2500ml～n0．05ml一。因此，后者即双波长共振光散 ng ng 射比率法明显优于前者。另外，在／300o和丘76以94o数据的基础上，我们还做了Scatchard[]来 研究fsDNA和HM之间的相互作用，并计算出两者的结合数(”)和结合常数(的。使用单波 长共振光散射法和双波长共振光散射比率法所得到的结合数和结合常数分别为13．5和1．35× 65×105mol。1l。 105moll～．以及11．9和1 (2)以阴离子染料苋菜红(AAT)和蛋白质的相互作用为例，通过双波长共振光散射比 率法对样本中的人血清白蛋白(HSA)和牛血清白蛋白(BSA)进行了测定。在pH为4．10 的酸性缓冲介质中，蛋白质可以和苋菜红通过静电作用结合，其位于285．0rim处的共振光散 射信号大大增强。由此，我们可以通过单波ff：RLS技术来检测蛋白质，当AAT的浓度为8．0×