草莓乙烯受体fers1基因克隆及rnai植物表达载体构建.pdf

摘要 atlanassa 草莓(Fragaria 生草本植物。草莓果实鲜美，多汁，营养价值高，含有丰富Vc，草莓果实富含的营 养容易被人体消化、吸收，是老少皆宜的健康食品。每年夏季6~7月间是果实成熟采 摘季节。但由于其果皮极薄，含水量高，容易受微生物侵染和机械损伤而腐烂变质， 不耐贮运，传统的贮藏保鲜技术对草莓果实的保存时间并不长，在运输贮藏过程中造 成很大的经济损失。自上世纪八十年代末开始，国外一些试验室开展了利用转基因技 术延长果蔬成熟衰老过程的研究，我国在相关方面的研究起步较晚但发展很快，目前 已有多种植物利用反义ACS或ACO基因技术来延迟果实的成熟衰老过程。相关研究 表明，在草莓果实成熟阶段，乙烯的大量表达可能与受体基因FaErsl有关。深入研 究FaErsl基因功能将有助于揭示乙烯受体与非跃变型果实成熟的关系，从而为采用 生物技术手段提高草莓果实的贮运性能奠定基础。因此，本试验以全明星草莓组培叶 片为原材料，提取植物DNA基因组，设计特定引物，经PCR扩增得到目的片段。用 于构建ErsI目的片段的反义载体和RNAi表达载体。从而达到封闭该基因的效果。 主要结果如下： 片段即为全明星草莓乙烯受体FaErsl基因片段。 I-BamH (2)设计一对带有Sma I酶切位点特异性引物，反向克隆全明星草莓 I-BamHI酶切位点之间，构建成中间 FaErsI基因片段，连接至pBl221质粒的Xba 子和胁J的反义序列，定向插入到切除CaMV 35S启动 35S启动子的pBll21质粒中，构建 成反义表达中间载体pBll21-ana．Ersl。 I-BamH (3)设计一对带有Xba I酶切位点特异性引物，正向克隆全明星草莓 I—BamH 胁J『基因片段，连接至pBl221质粒的XbaI酶切位点之间，构建成中间 物表达载体pBll21一Ersl-RNAi。 菌LBA4404中，经特异性引物对转化菌液的PCR扩增，证实表达载体已转入农杆菌。 关键词：乙烯受体FaErsl基因；反义植物表达载体；RNA干扰表达载体； construction FaErsl andRNAi vector Strawberrygenecloning plantexpression Author：LiuSisi Science Major：Food Junlian Supervisor：Prof．Ma Abstract is torosaceae tothe herbs． Strawberry strawberryplants’films，belongperennial deliciousredis richfruit Strawberry tender,juicypulp，containsspecial aroma．High richvitamin thesame nutritional effect,at time