副溶血弧菌噬菌VPp1在牡蛎净化中的应用及其规模化制备和保存.pdfVIP

谨以此论文献给我的导师、敬爱的父母 以及帮助过我的人。 荣蓉 万方数据 万方数据 万方数据 副溶血弧菌噬菌体VPp1 在牡蛎净化中的应用 及其规模化制备和保存 摘 要 副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）是一种主要的食源性致病菌，广泛分 布于海洋环境中并极易富集在牡蛎等海产贝类体内。牡蛎味道鲜美、营养丰富， 多数消费者喜爱生食或者稍加烹调即食用，以此来保持其细腻的质地和鲜美的风 味，若食用被该菌污染的牡蛎则会引起人体食物中毒，对公众健康造成极大威胁。 为了探索行之有效的净化牡蛎体内副溶血弧菌的方法并将之推广应用于实 际工厂操作中，本研究以副溶血弧菌噬菌体VPp1 为研究对象，首先将其用于活 体牡蛎中副溶血弧菌的净化，将噬菌体液加入牡蛎养殖水体中，取得明显的净化 效果；在此基础上将实验扩大至净化车间中并初步研究了该噬菌体规模化制备和 保存条件，为该噬菌体的工业化应用奠定基础。主要研究结果如下： 1、将噬菌体VPp1 用于牡蛎体内副溶血弧菌的净化，发现其对牡蛎体内的 副溶血弧菌有明显的净化作用。在实验室规模中，初步得出适宜的净化条件为： 水温16 C，噬菌体VPp1 的添加浓度是MOI 值为0.1 。在此条件下经过36 h 净 化，可使牡蛎体内的副溶血弧菌数量降低2.35-2.76 log CFU/g 。进一步将净化实 验扩大至工厂化规模，净化36 h 后，可以将染菌后牡蛎体内的副溶血弧菌含量 降低1.11 log CFU/g，另外对于牡蛎体内富集的自然环境中的副溶血弧菌及其他 海洋性弧菌的增殖可以起到抑制作用。整个净化过程中噬菌体VPp1 在不影响正 常菌群的情况下可有效的裂解宿主菌并抑制其他弧菌增殖，并且不会对牡蛎的感 官特性产生负面影响，能最大限度的降低牡蛎损失。另外，该净化过程具有所需 设备简便易得、成本较低的特点，在贝类净化中具有很大应用潜力。 2 、为了满足噬菌体工业化生产的需求，将发酵技术用于噬菌体VPp1 的规 模化制备，采用单因素实验得到了噬菌体增殖的最佳条件：培养基 pH 为 7.3， 不需特意调节；培养基中Ca2+ 、Mg2+ 的添加浓度为20 mmol/L ；接种所用噬菌体 MOI 值为0.0001 ；培养温度为37 C ；培养转速为200 r/min ；培养时间为10 - 12 h ，按照以上条件利用 5 L 发酵罐进行噬菌体的制备实验，所得噬菌体的效价 （10.74 log PFU/mL）增长幅度得到明显提高，比对照组高出3.79 个数量级。 万方数据 3、为了筛选出适宜于噬菌体冷冻干燥后长期保存的保护剂，本研究将不同 种类、不同浓度的保护剂用于噬菌体VPp1 的冷冻干燥，并对冻干样品的性质进 行研究，结果表明：最适合噬菌体 VPp1 进行冷冻干燥保存的保护剂为海藻糖， 适宜浓度为 0.3 mol/L 。此时，噬菌体冻干样品具有很高的热稳定性，吸热峰峰 值（Tm ）为 167.3 C ；复水后经透射电镜观察噬菌体形态规则；测定该样品含 水量为7.5% ；保存四个月后该样品效价保存率最高，为98.8% 。 综上所述，副溶血弧菌噬菌体VPp1 在牡蛎净化中显示出了极大的应用潜力。 另外，对该噬菌体规模化制备条件和冷冻干燥保存方面的研究为噬菌体的工业化 应用提供了理论基础。 关键词：噬菌体；副溶血弧菌；牡蛎净化；规模化制备；冷冻干燥 万方数据 The Application in Oys