动态高压微射流术对聚半乳糖醛酸酶活性与构象的影响.pdfVIP

8810帆 qlYtlllllllllllll9ltllllllllllllllllllllllll4Y192 摘要 摘要 动态高压微射流是一种新兴技术，可以对物料进行高速剪切，气穴作用等， 其工作压力最高可达200MPa。聚半乳糖醛酸酶(PG)属于果胶酶家族的一员， 果胶是植物细胞壁中的一种结构性多糖，而PG主要是水解组成果胶酸的D． 半乳糖醛酸a—l，4．糖苷键，从而降解植物组织。其组织软化功能在食品 工业中的果汁提取和澄清中得到广泛使用。本课题通过酶活测定、圆二色 谱、紫外吸收光谱和游离巯基与巯基总量的测定来研究动态高压微射流对PG 酶活性和构象的影响，同时研究了热、金属离子和乙醇对PG酶的影响，揭示 了PG酶活性与构象间存在着的一定的关联性。 通过动态高压微射流对PG酶进行处理，研究了PG酶活性与构象之间的 关系。PG酶的最适宜反应温度为50℃。DHPM处理降低了PG酶的活性，降 低后的酶活性在76．5％．94．5％。经过DHPM处理后的PG酶的构象分析显示PG 酶的二级结构的B．折叠含量降低了，同时PG酶分子结构更为“松散。其活性 变化与p．折叠含量的变化呈一定程度的正相关，但不是简单的线性相关。原来 包埋在分子内部的Trp和Tyr残基部分暴露出来，分子表面的二硫键被打断形 成巯基，但从分子整体来看，新的二硫键形成的量要多于被打断的量。 通过热和动态高压微射流对PG酶进行处理，在50℃下保温半小时的酶活 性最大，在其他温度下保温半小时的酶活性均有所降低，而在70℃下保温半小 时的酶相对活性只有39．2％。在不同的温度下处理后的PG酶经过DHPM处理 后的酶活性的降低程度比单独经过DHPM处理后的酶活性降低程度要大，这说 明热与动态高压微射流协同处理的效果要好过单独热处理或是单独DHPM处 理。PG酶的温控曲线明确表现出了PG酶的变性温度在60．65℃之间。从本实 验可以看出，PG酶对温度还是敏感的，尤其是高温。 一些金属离子对PG酶起激活作用，一些起抑制作用，还有一些对酶活性 作用，Mn2+对PG酶有激活作用。Na+对酶活力没有表现出明显的影响，不过他 们的机理不尽相同。而DHPM处理对这一结果没有产生较大的影响。除了Mn2+， 摘要 a_z+、Baz+、Na+、Zn2+、 Mn2+对经过动态高压微射流处理的PG酶没有激活作用。C Mn2+、M92+均没有对PG酶的温控曲线产生较大的影响。 本实验还研究了乙醇(20％)对PG酶活性与构象的影响。PG酶在20％的 乙醇溶液中活性降低了，只有未加乙醇的PG酶活性的75％。随着时间的增加， h后，酶的活性降低幅度增大，而20％的乙醇对PG酶 酶的活性随之降低，24 的CD谱并未造成太大影响。因此，我们得出结论：乙醇对酶的二级结构可能 未造成影响，它是通过影响酶的三级结构来影响酶的活力。乙醇对PG酶的温 控曲线未造成影响，其变性温度依然处在60．65℃。 关键词：动态高压微射流；聚半乳糖醛酸酶；活性；构象；圆二色谱 II Abstract ABSTRACT Dynamic a Hi曲PressureMicrofluidization(DHPM)isnewlydeveloped usesthecombinedforcesof technology,which shear,cavitation，andultra-hi曲 to200 amemb